Zespół długiego QT, zespół Brugadów i choroba układu przewodzącego są powiązane z pojedynczą mutacją kanału sodowego ad 6

Nasze początkowe badania z mutantem 1499 dały V1 / 2h. 92. 1,6 mV (n = 6). To sugeruje, że długość łącznika jest ważna w ujemnym przesunięciu. Zbadaliśmy wpływ przywrócenia długości łańcucha poprzez przeprowadzenie mutacji K1500Q. Ta mutacja ma taką samą długość łańcucha jak kanał typu dzikiego i, podobnie jak mutacja 1500, jest związana ze zmianą ładunku A1. V1 / 2 dla inaktywacji zmutowanego kanału K1500Q nie różni się od tego dla typu dzikiego: 83,2. 0,8 mV (n = 6) wobec. 84,5. 1,3 mV (n = 9), odpowiednio. Jednakże, podobnie jak w przypadku. K1500, V1 / 2 dla aktywacji K1500Q przesunięto na bardziej pozytywne potencjały:. 38,3. 0,8 mV (n = 6) w porównaniu do. 47. 1,5 mV dla typu dzikiego (n = 9). Wyniki te dodatkowo potwierdzają wniosek, że podstawową rolą K1500 jest aktywacja kanału. Figura 6 Parametry bramkowania inaktywacji i aktywacji w komórkach wyrażających zmutowane kanały Na + typu dzikiego, 1500, K1500E i K1500Q. Inaktywację i aktywację określano za pomocą standardowych protokołów z zaciskami napięciowymi. Wartości dla m. i H. są środkami 9, 13, 12 i 6 eksperymentów odpowiednio dla hH1, 1500, 15, 1500E i K1500Q. V1 / 2m dla hH1 znacząco różniło się od V1 / 2m dla K1500E i K1500Q. V1 / 2h dla 1500 znacząco różni się od V1 / 2h dla hH1, K1500E i K1500Q. Paski przedstawiają SEM. Mała różnica w szybkości relaksacji prądu makroskopowego (stała czasowa relaksacji. ms) (Figura 5b) jest mało prawdopodobna, aby uwzględnić przedłużenie odstępu QT obserwowane w dotkniętej chorobą rodzinie. Aby określić, czy późny składnik prądu Na + może odpowiadać za wydłużenie odstępu QT, zarejestrowaliśmy prądy całych komórek z 200-ms impulsami przy wysokim wzmocnieniu w komórkach wyrażających zmutowane i zmutowane kanały typu 1500. Figura 7 ilustruje wyniki z eksperymentów w komórkach wyrażających każdy typ kanału. Przy 100 ms prąd trwały wyniósł 0,4% prądu szczytowego w typie dzikim i 1,5% w. 1500. Podsumowanie danych przedstawiono na rysunku 7c (hH1, n = 4; K1500, n = 5). Mutacja 1500 była związana z potrójnym wzrostem późnego składnika prądu Na +. Figura 7 Porównanie późnego składnika prądu Na + ze zmutowanymi kanałami Na + dzikiego typu i zmutowanego z K1500. (aib) Prąd Na + rejestrowano przy wysokim wzmocnieniu (górny ślad) i niskim wzmocnieniu (dolny ślad) z 200-ms impulsami z potencjału utrzymywania wynoszącego. 100 mV do potencjału testowego. 20 mV. Prądy zostały odjęte od wycieku. Przerywane linie pokazują bieżący poziom 0. (c) Średni prąd w stanie ustalonym (Iss) wykreślono jako funkcję prądu szczytowego (n = 4, hH1; n = 5, 1500). (d i e) Prądy jednokanałowe rejestrowane w przyłączonych komórkach plastrach błonowych z 200-ms impulsami do potencjału testowego . 20 mV z mikroelektrodami o niskiej oporności. Cztery górne znaczniki w każdym panelu pokazują odpowiedzi na cztery kolejne próby. Najniższe odcinki pokazują średni prąd. Linie przerywane wskazują bieżący poziom 0. Badania jednokanałowe. Duże ujemne przesunięcie V1 / 2h w zmutowanych kanałach 1500 może wynikać w całości ze wzmocnienia inaktywacji w stanie zamkniętym. Nie jest jasne, czy dotyczy to również dezaktywacji w stanie otwartym. Wcześniejsze badania sugerowały, że triplet IFM znajdujący się w międzywęźle kontrolowanym linkerem III / IV kontroluje inaktywację w stanie otwartym. Zbadaliśmy wpływ mutacji 1500 na dezaktywację stanu otwartego przez rejestrację pojedynczych prądów kanałowych Na + w przyczepionych do komórek łatkach błonowych. W jednym z protokołów stosowaliśmy mikroelektrody o wysokiej oporności i zmniejszaliśmy potencjał membrany, aby ograniczyć liczbę zachodzących na siebie zdarzeń. Jednokanałowa amplituda prądu była podobna w obu typach kanałów (1,4. 0,1 i 1,55. 0,05 pA; n = 4 dla obu hH1 i. 1500). Jednakże, średni czas otwarty był znacząco zmniejszony u mutanta 1500 (0,66. 0,02. Ms w typie dzikim vs. 0,56. 0,03 ms w zmutowanym. 1500, P <0,05). Wynik ten wskazywał, że mutacja 1500 również zwiększała szybkość zamykania kanału otwartego. Przy ~ 20 mV kanały są zamykane głównie przez inaktywację (25, 26). Rysunek 7, d i e, porównuje prądy jednokanałowe zarejestrowane z mikroelektrodami o niskiej oporności w kanałach typu dzikiego i zmutowanych 1500. Większa końcówka mikroelektrody umożliwia nagrywanie z poprawek zawierających około 20 kanałów. Takie nagrania pozwoliły na analizę nietypowych zdarzeń, takich jak późne otwarcie kanałów Na +, przy użyciu stosunkowo niewielkiej liczby prób depolaryzacji. Pierwsze cztery próby na rys. 7, d i e, pokazują prądy zarejestrowane przy ~ 20 mV z 200-ms impulsami. Najniższy ślad w każdym panelu pokazuje prądy uzyskane przez uśrednienie 499 prób typu dzikiego i 300 1500 prób [hasła pokrewne: zapytaj trenera, masaż nuru na czym polega, dieta przyspieszająca metabolizm jadłospis ] [więcej w: zapytaj trenera, mma core, mmacore ]