Uszkodzenie DNA jest nową odpowiedzią na subiektywne uszkodzenie indukowane przez C5b-9a dopełniacza w podocytach

W odpowiedzi na uraz, w którym pośredniczy AB-dopełniacz, podocyty mogą ulegać lizie, apoptozie lub, gdy są eksponowane na podmineryczne (<5% liza) ilości C5b-9, ulegają aktywacji. Po wprowadzeniu sub-przestrzennych ilości C5b-9 następuje wzrost szlaków sygnałowych i synteza czynnika wzrostowego oraz uwalnianie proteaz, utleniaczy i innych cząsteczek. Pomimo wzrostu syntezy DNA, sub-metylo-C5b-9 jest związany z opóźnieniem w progresji fazy G2 / M w podocytach. W tym miejscu indukowaliśmy subtelne uszkodzenie C5b-9 in vitro przez wystawienie hodowanych podocytów szczurzych lub zróżnicowanych postocytotycznych podocytów myszy na Ab i źródło komplementacji; badaliśmy także pasywny model zapalenia nerek Heymann w doświadczalnej nefropatii błoniastej u szczurów. Głównym odkryciem było to, że podmiejskie uszkodzenie indukowane C5b-9a powodowało wzrost uszkodzenia DNA w podocytach, zarówno in vitro, jak i in vivo. Było to związane ze wzrostem poziomów białka dla p53, inhibitora CDK p21, uszkodzenia DNA zatrzymującego wzrost-45 (GADD45) i kinaz punktu kontrolnego-1 i -2. Subtelne C5b-9 zwiększyło pozakomórkową regulowaną kinazę i -2 (ERK-1 i -2), a hamowanie ERK-1 i -2 zmniejszyło wzrost p21 i GADD45 i zwiększyło odpowiedź na uszkodzenie DNA do sub511 C5b-9 uraz wywołany. Wyniki te pokazują, że sub5retyczny C5b-9 indukuje uszkodzenia DNA in vitro i in vivo i może wyjaśniać, dlaczego proliferacja podocytów jest ograniczona po urazie za pośrednictwem układu immunologicznego. Wprowadzenie Trzewna komórka nabłonka kłębuszkowego, czyli podocyt, jest końcowo zróżnicowaną komórką na zewnętrznym aspekcie błony podstawnej kłębuszkowej. Podocyty są celem uszkodzeń immunologicznych i uszkodzeń nieimmunologicznych, takich jak toksyny, wirusy, napięcie naprężenia i czynniki przepuszczalności. Układ dopełniacza jest silnym mediatorem uszkodzenia kłębuszkowego w kompleksie immunologicznym kłębuszkowego zapalenia nerek. Liczba kompleksów C5b-9 (atak błony) wprowadzonych do błon komórkowych determinuje, czy komórki ulegają lizie (zwanej również martwicą) (1). Konsekwencje subtelnego ataku C5b-9 obejmują uwalnianie wapnia, aktywację specyficznych szlaków sygnałowych (2), wzrost specyficznych czynników wzrostu, składników macierzy (3), utleniaczy i proteaz (4, 5), aw pewnych okolicznościach apoptoza . Podocyty wchodzą w cykl komórkowy po urazie subiektywnym i ulegają syntezie DNA, aczkolwiek ograniczone (6). W odróżnieniu od mezangialnych i niektórych nienerkowych komórek, podocyty zazwyczaj nie ulegają mitozie po subtelnym uszkodzeniu C5b-9 (7, 8). Mechanizmy leżące u podłoża pozornej niezdolności podocytów do proliferacji po subtelnym wywołanym C5b-9c uszkodzeniu nie zostały dobrze wyjaśnione. Na podstawie charakterystycznego odkrycia poliploidalnego podocytu obecnego w chorobach podocytu, takiego jak doświadczalna nefropatia błoniasta (9), niektórzy sugerują, że istnieje defekt w mitozie. Ostatnie badania wykazały, że uszkodzenie DNA wywołane przez promieniowanie UV jest związane z zatrzymaniem cyklu komórkowego, co pozwala komórkom wystarczająco długo na pojawienie się odpowiednich mechanizmów naprawy DNA (10). Nieodpowiednia naprawa prowadzi do propagacji uszkodzonego DNA do komórek potomnych, z niepożądanymi konsekwencjami. Tutaj przedstawiamy dane, że nowatorską konsekwencją subtelnego uszkodzenia podocytów C5b-9 jest uszkodzenie DNA. Nasze wyniki pokazują, że subtelny C5b-9 indukuje uszkodzenia DNA na podocytach myszy i szczura in vitro, jak również in vivo w pasywnym modelu nefropatii błoniastej Heymanna (PHN). Pokazujemy również, że specyficzne geny związane z cyklem komórkowym, w tym p53, p21, uszkodzenie DNA z zatrzymaniem wzrostu -45 (GADD45), punkt kontrolny kinaza-1 (CHK-1) i CHK-2, są aktywowane przez sub-graficzne C5b-9. Ponadto pokazujemy, że pozakomórkowa kinaza regulowana sygnałem (ERK) jest krytyczną ścieżką zaangażowaną w regulację tych białek związanych z cyklem komórkowym po indukowanym przez C5b-9c uszkodzeniu DNA w podocytach i że ERK chroni podocyty przed uszkodzeniem DNA. Metody Komórki w hodowli Podocyty szczurów. Szczurze komórki nabłonkowe kłębuszkowe szczura, również nazywane podocytami, zostały utworzone w hodowli jak opisano poprzednio (6). W niektórych eksperymentach badano spoczynkowe podocyty szczurów, aby bardziej przypominać spoczynkowy fenotyp podocytów in vivo przez pozbawienie ich czynników wzrostu przez 48 godzin. Reasumowanie potwierdzono analizą FACS i barwieniem BrdU (11, 12). Podocyty eksponowano na Ab i źródło komplementu (opisane poniżej) i mierzono uszkodzenie DNA (opisane poniżej). Zróżnicowane postocytotyczne podocyty myszy. Aby zapewnić, że wyniki uzyskane na podocytach szczurów pojawiły się również u innych gatunków oraz w komórkach, które lepiej reprezentują komórki in vivo, wykorzystaliśmy dobrze scharakteryzowane zróżnicowane poposiłkowe podocyty myszy (uzyskane od Petera Mundela, Alberta Einsteina College of Medicine, Nowy Jork, Nowy Jork , USA), określane jako warunkowo unieśmiertelnione podocyty myszy
[podobne: dieta przyspieszająca metabolizm jadłospis, koszt rezonansu magnetycznego, ankos zapasy warszawa ]
[podobne: techniki mma, kimura chwyt, łojotokowe zapalenie skóry głowy wypadanie włosów ]