Uszkodzenie DNA jest nową odpowiedzią na subiektywne uszkodzenie indukowane przez C5b-9a dopełniacza w podocytach ad 8

Drugim ważnym odkryciem w obecnym badaniu było to, że podmiejskie uszkodzenie wywołane C5b-9a zwiększało poziomy p53 w podocytach myszy i szczura in vitro oraz w eksperymentalnej błoniastej nefropatii in vivo. Do tej pory wzrost poziomów p53 opisano tylko w odpowiedzi na uszkodzenie wywołane przez naświetlanie UV i niektóre czynniki uszkadzające DNA (28). Możemy teraz dodać subtelne uszkodzenia DNA do listy obrażeń zwiększających poziom p53. Inhibitor CDK p21 hamuje progresję cyklu komórkowego w G1 / S i G2 / M (29), a p21 jest zwiększone w podocytach u szczurów PHN (19). Proliferacja podocytów jest znacznie zwiększona u myszy z p21-null z zahamowanym kłębuszkowym zapaleniem nerek (30). W tym badaniu wykazaliśmy, że p21 jest również zwiększony w podocytach w hodowli, co potwierdza nasze odkrycia in vivo w odpowiedzi na sub-matyczne C5b-9. Badania wykazały, że po uszkodzeniu DNA konieczne są wzrosty p21 zależne od p53, aby zatrzymać progresję cyklu komórkowego, aby dać odpowiedni czas na mechanizmy naprawy DNA (31). Odpowiednio, spekulujemy, że wzrost w p21 na uszkodzonych podocytach C5b-9a in vitro i in vivo może wynikać ze zwiększonej ekspresji p53 w wyniku uszkodzenia DNA. Zwiększone p21 z kolei hamuje proliferację podocytów w fazach G1 / S i G2 / M. GADD45 (zatrzymanie wzrostu i uszkodzenie DNA) to rodzina genów odpowiedzialnych za komórkową odpowiedź na uszkodzenie DNA (32). Nasze dane pokazały, że GADD45 jest zwiększany po subiektywnym uszkodzeniu in vitro i in vivo. Transkrypcja GADD45, przynajmniej częściowo, jest indukowana przez p53 w odpowiedzi na uszkodzenie DNA indukowane przez promieniowanie UV i jonizujące i inne czynniki uszkadzające DNA. GADD45 wiąże się z antygenem jądrowym proliferacji komórkowej w kilku resztach, powodując w ten sposób zatrzymanie cyklu komórkowego, a GADD45 może również uczestniczyć w naprawie jądra uszkodzonego DNA (33, 34). GADD45 jest zazwyczaj wyrażany na niskim poziomie podczas fazy S, ale jest szybko wywoływany w odpowiedzi na uszkodzenie DNA. Ekspresja białka GADD45 była zwiększona w podocytach eksponowanych in vitro na C5b-9, a także w kłębuszkach z szczurów PHN. Ostatnie badania wykazały, że faza G2 / M jest również hamowana przez rodzinę białek znanych jako inhibitory kinazy punktu kontrolnego (CHK-1 i CHK-2) (35). Trzecim ważnym odkryciem w tym badaniu było to, że podjednostkowe uszkodzenie podocytów wywołane C5b-9a zwiększało poziomy CHK-1 i CHK-2 in vitro i na podocytach in vivo w modelu PHN. Warto zauważyć, że poziomy CHK-1 i aktywność są częściowo regulowane przez p53. Obserwacje te doprowadziły nas do sugestii, że wzrost p53 w bieżącym badaniu może również ograniczyć proliferację podocytów poprzez zwiększenie poziomów białka CHK. ERK, członek kinaz MAP, wykazali Cybulsky i in. do zwiększenia podocytów po subtelnym uszkodzeniu C5b-9 (36). Czwartym odkryciem w obecnym badaniu było to, że hamowanie ERK spowodowało wyraźne zmniejszenie p21 i GADD45. Wykazano, że ERK bierze udział w odpowiedzi sygnałowej na indukowane promieniowaniem UV uszkodzenie DNA. Badania przeprowadzone przez Krausa wykazały także wzrost fosforylowanej ERK w komórkach COS i K562 w odpowiedzi na subtelne uszkodzenie C5b-9 (37). Nasze wyniki pokazały jednak, że hamowanie ERK-1 i -2 wzmacniało reakcję uszkadzania DNA sub-subtelnego C5b-9 w podocytach. Podsumowując, nasze dane sugerują, że po subtelnym urazie indukowanym C5b-9a, zwiększona aktywacja ERK chroni podocyty przed uszkodzeniem DNA przez zwiększenie p21 i GADD45, Podsumowując, należy zbadać możliwość, że indukowane przez C5b-9a uszkodzenie podocytów może spowodować uszkodzenie DNA, do naszych badań wykorzystaliśmy hodowane podocyty i model nefropatii błoniastej PHN, ponieważ w tym modelu uszkodzenia indukowane przez AB-dopełniacz można badać zarówno in vitro, jak i in vivo w warunkach naśladujących chorobę błoniastą nerek u ludzi. W PHN, IgG Ab na antygen (y) podocytów na błonie komórkowej wiąże się wyłącznie z podocytem i prowadzi do insercji C5b-9 do błony podocytowej, co w konsekwencji prowadzi do niejednorodnej postaci uszkodzenia, która powoduje białkomocz. Model PHN jest zależny od C5b-9 i jest zależny od cząsteczek, takich jak utleniacze (38) i proteazy (39, 40), które są wytwarzane przez podocyty w odpowiedzi na subtelny atak C5b-9. Ten sam system ataku Ab / C5b-9 można również replikować za pomocą podocytów in vitro. Przez manipulowanie obecnością lub nieobecnością C6 w tych układach, można badać konsekwencję ataku C5b-9 na podocyty i można ocenić wpływ na białka regulatorowe cyklu komórkowego i geny odpowiedzi na uszkodzenie DNA. Wnioskujemy, że nowatorska reakcja na subiektywny atak C5b-9 na komórki jądra jest uszkodzeniem DNA. W przypadku podocytów uszkodzenie DNA może wyjaśniać częściowo brak proliferacji w niektórych chorobach kłębuszkowych zależnych od układu odpornościowego. PodziękowaniaTo dzieło było wspierane przez granty Publicznej Opieki Zdrowotnej (DK34198, DK52121, DK51096, DK56799), George M Grant O. Brien Kidney Center (DK47659) oraz Nagroda Fundacji Juvenile Diabetes Research (SJ Shankland). SJ Shankland otrzymał nagrodę American Investigation Award dla Amerykańskiego Towarzystwa Kardiologicznego. Dziękujemy Peterowi Mundelowi za użycie podocytów myszy. Przypisy Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów. Zastosowano niestandardowe skróty: pasywne zapalenie nerek Heymann (PHN); kinaza punktu kontrolnego (CHK); zatrzymanie wzrostu DNA-45 (GADD45); pozakomórkowa kinaza regulowana sygnałem (ERK); szczurzą komórka mezangialna (RMC); Piebald Virol Glaxo (PVG); obecny funkcjonalny układ dopełniacza (C +); funkcjonalny układ dopełniacza nieobecny (C.); dehydrogenaza mleczanowa (LDH); pasywne zapalenie nerek Heymann (PHN); apurynowo-apirymidynowy (AP); jednoniciowy DNA (ssDNA); reagent na sondę reaktywną względem aldehydu (ARP); kinaza zależna od cyklin (CDK).
[patrz też: techniki mma, czarna porzeczka odmiany, ciasto marchewkowe wegańskie ]
[przypisy: trening pod sztuki walki, techniki mma, kimura chwyt ]