Uszkodzenie DNA jest nową odpowiedzią na subiektywne uszkodzenie indukowane przez C5b-9a dopełniacza w podocytach ad 6

Immunobarwienie p53 nie zostało wykryte w kłębuszkach kontrolnych. Przeciwnie, zaobserwowano wyraźny wzrost immunobarwienia p53 u szczurów PHN w podocytach. Figura 5 pokazuje również analizę Western blot przeprowadzoną na białku wyekstrahowanym z izolowanych kłębuszków nerkowych i potwierdza, że poziomy białka p53 były zwiększone w kłębuszkach z szczurów PHN w porównaniu ze szczurami kontrolnymi. Figura 5 Białka uszkadzające DNA zwiększają szczury PHN. Immunobarwienia p53 (a), p21 (c) i fosforylowanego CHK-2 (e) nie wykryto u szczurów kontrolnych, którym wstrzyknięto normalną surowicę owczą. Przeciwnie, p53 (b), p21 (d) i fosforylowane barwienie immunologiczne CHK-2 (f) wzrosło u szczurów Sprague-Dawley za pomocą PHN (strzałki wskazują podkryty wybarwione dodatnio). g Wyniki analizy Western blot przeprowadzonej na izolowanym białku kłębuszkowym szczurów kontrolnych i PHN. U zwierząt PHN poziomy ufosforylowanych (phos) CHK-1 i CHK-2, p53, p21 i GADD45 wzrosły w porównaniu z kontrolami. Białka utrzymujące porządek, aktynę i tubulinę zastosowano w celu zapewnienia równego załadowania białka. Aby potwierdzić, że wzrost p53 był spowodowany C5b-9, zbadaliśmy również ekspresję p53 w PVG C. i szczurom PVG C +, którym wstrzyknięto przeciwciało anty-Fx1A. Jak oczekiwano, obserwowano wzrost poziomów p53 mierzony przez barwienie immunologiczne i analizę Western blot u szczurów PHN PVG C +, których nie wykryto w PVG C. zwierzęta, którym wstrzyknięto anty-Fx1A (wyników nie pokazano). Podsumowując, wyniki te pokazują, że ekspresja p53 wzrasta in vitro i in vivo po ekspozycji na Ab i źródło dopełniacza i że ten efekt był konsekwencją tworzenia C5b-9. Specyficzne białka cyklu komórkowego są zwiększone w podocytach po ataku C21-9 p21Cip / Kip (p21). Figura 4 pokazuje, że inhibitor kinazy zależnej od cykliny (CDK) p21 był zwiększony na szczurzym (Figura 4a) i mysie (Figura 4b) podocyty wystawione na Ab i źródło dopełniacza. Przeciwnie, p21 nie wzrastało w kontrolnych komórkach eksponowanych na Ab bez źródła dopełniacza. Immunowe barwienie dla poziomów białka p21 również zwiększono in vivo u szczurów PHN (Figura 5). Wzrost potwierdzono analizą Western blot przeprowadzoną na białku z izolowanych kłębuszków (Figura 5). Poziomy p21 były również zwiększone u szczurów PVG C + z PHN mierzonym przez immunobarwienie w typowym rozmieszczeniu podocytów (wyników nie pokazano). Przeciwnie, ekspresja p21 nie wzrastała w PVG C. szczurom, którym wstrzyknięto przeciwciało anty-Fx1A. Wyniki te pokazują, że C5b-9 zwiększa poziom p21 in vitro i in vivo. GADD45. Figura 4 pokazuje, że GADD45 wykryto na niskich poziomach u szczurów kontrolnych (Figura 4a) i podocytów myszy (Figura 4b) i że poziomy wzrosły w podocytach po subtelnym ataku C5b-9. Białko GADD45 było również zwiększone u szczurów z PHN mierzonym za pomocą analizy Western blot (Figura 5) i u szczurów PVG + z PHN (dane nie pokazane). Wzrost GADD45 u szczurów PHN wykryto również przez barwienie immunologiczne i wzrost umiejscowiono w podocytach (wyniki nie pokazane). Natomiast poziomy GADD45 nie wzrosły w PVG C. szczurom, którym wstrzyknięto przeciwciało anty-Fx1A. Podsumowując, wyniki pokazują, że C5b-9 zwiększa GADD45. CHK-1 i CHK-2. W podocytach szczurzych i mysich całkowite poziomy CHK-1 i CHK-2 były w małej ilości w komórkach kontrolnych eksponowanych na Ab bez źródła dopełniacza (Figura 4). Przeciwnie, Figura 4 pokazuje wzrost fosforylowanych CHK-1 i CHK-2 u szczurów (Figura 4a) i mysich (Figura 4b) podocytów in vitro wystawionych na działanie Ab i źródła dopełniacza. Całkowite poziomy CHK-1, ale nie CHK-2, wzrosły po subtelnym uszkodzeniu C5b-9 na podocytach szczurzych i mysich (Figura 4, aib). Figura 4 pokazuje również, że wzrost całkowitego i fosforylowanego białka nie był spowodowany do różnic w obciążeniu białkiem, ponieważ nie było różnicy w poziomach białka w białkach porządkowych, tubulinie i aktynie. Poziomy CHK-1 i CHK-2 badano również in vivo na białku wyekstrahowanym z izolowanych kłębuszków z PHN i szczurów kontrolnych. Figura 5 pokazuje, że chociaż całkowite CHK-1 i CHK-2 wykryto u szczurów kontrolnych i PHN, fosforylowane CHK-1 i CHK-2 nie wykryto u kontrolnych szczurów Sprague-Dawley i PVG C. (dane nie pokazane). CHK-1 (wyniki nie pokazane) i barwienie immunologiczne CHK-2 zwiększono u szczurów Sprague-Dawley (Figura 5f) i szczurów PVG C + (nie pokazano) z PHN, w typowym rozmieszczeniu podocytów. Analiza Western blot wykazała także wzrost fosforylowanego CHK-1 i CHK-2 po ekspozycji indukowanej przez C5b-9p in vivo u szczurów PHN Sprague-Dawley (Figura 5) i szczurów PVG C + (danych nie przedstawiono). Wyniki pokazują fosforylowane (i biologicznie aktywne) formy wzrostu CHK-1 i CHK-2 w podocytach in vitro i in vivo po ataku dopełniacza, a ten efekt jest konsekwencją tworzenia C5b-9. Hamowanie ERK zmniejsza geny odpowiedzi DNA i zwiększa uszkodzenia DNA Figura 6a pokazuje czasową ekspresję fosforylowanych ERK-1 i -2, mierzoną analizą Western blot, po ekspozycji na podocyty in vitro do sub-metalicznego ataku C5b-9
[hasła pokrewne: zapytaj trenera, nr na pogotowie ratunkowe, fundacja dzieciom zdążyć z pomocą logowanie ]
[podobne: ciasto z truskawkami moje wypieki, czarna porzeczka odmiany, zapytaj trenera ]