Sercowy grzbiet nerwowy koordynuje przebudowę i funkcjonalne dojrzewanie zastawek półksiężycowatych myszy czesc 4

Niedawno wykazaliśmy, że zahamowanie sygnalizacji Notch w drugim polu sercowym powoduje złożony układ wypływu i nieprawidłowości w tętnicach obwodowych, które są uderzająco podobne do tych, które wynikają z defektów grzebienia nerwowego (15). Ponieważ drugie prekursory pól serca migrują przez mezenchymię gardła, znajdują się one w pobliżu migrujących komórek grzebienia nerwowego. Dlatego postulowaliśmy, że defekty sercowo-naczyniowe w drugim mutancie pola serca Notch są po części spowodowane nienormalnym wzorcem grzebienia nerwowego (15). W związku z tym próbowaliśmy zbadać zastawki półksiężycowate w mutantach Notch drugiego pola serca, aby określić, czy wykazują nieprawidłowości podobne do tych obserwowanych w mutantach grzebienia nerwowego Pax3. Zakłócenie sygnalizacji Notch w drugim polu sercowym osiągnięto przez indukowaną przez cre ekspresję skróconej postaci białka białkowego podobnego do masterminda DNMAML, stosując 2 odrębne myszy z drugim polem serca, Islet1Cre / + i Mef2c-AHF-Cre. Wszystkie 4 ssacze receptory Notch oddziałują z białkami podobnymi do masterminda po aktywacji za pośrednictwem ligandu i translokacji do jądra. DNMAML jest dobrze scharakteryzowaną skróconą postacią białka podobnego do masterminy, która działa jako specyficzny i skuteczny inhibitor Notch, wiążąc się z domeną wewnątrzkomórkową Notch i zapobiegając rekrutacji koaktywatorów. Użyliśmy myszy, w których DNMAML (zapukany do konstytutywnie aktywnego locus Rosa26) ulega ekspresji w sposób specyficzny tkankowo po aktywacji przez rekombinazę cre (41). Potwierdziliśmy, że aktywacja DNMAML w drugim polu serca przez Islet1Cre / + lub Mef2c-AHF-Cre doprowadziła do nieprawidłowego wzoru grzebienia nerwowego w poduszkach wewnątrzsercowych w przestrzeni odpływowej. Islet1Cre / +, DNMAML i Mef2c-AHF-Cre; Zarodki mutantów DNMAML wykazały niedobór ekspresji Sema3C w poduszkach wypływowych przy E11.5 (Figura 3, C i D). Wyniki te potwierdziliśmy drugim znacznikiem pogorzelnego grzebienia nerwowego, PlexinA2. Ekspresja PlexinA2 była obniżona u myszy Pax3Cre / Cre, Islet1Cre / +, myszy DNMAML i Mef2c-AHF-Cre, mutantów DNMAML (Figura 3, E (H)). Podobnie, AP2. ekspresja (trzeci marker grzejącego nerwowego grzebienia nerwowego) wykazywała niedobór Mef2c-AHF-Cre, mutantów DNAMAML (Figura 3, I i J). Nieprawidłowe wzorowanie się na grzebieniu neuronowym w drugim mutancie serca Notch sugeruje, że Notch jest mediatorem sygnalizacji między drugim polem serca a migrującym grzebieniem nerwowym. Wykryliśmy zastosowanie migrujących pochodnych grzebienia nerwowego i mezodermy gardłowej wyrażającej Islet1 już w E9.5 w obrębie gardła brzusznego. Zarodki Pax3Cre / +; Z / EG (w których allel Z / EG służy jako allel cre-reporter, który aktywuje ekspresję GFP w odpowiedzi na rekombinację za pośrednictwem czynnika pośredniego, patrz 42) wykazał pochodne grzebienia nerwowego sąsiadujące z klastrami Islet1- wyrażanie drugich komórek pola serca (Figura 3, K i L). Jest to potencjalne miejsce sygnalizacji parakrynnej między populacjami 2 komórek. Analiza OPT, a następnie rekonstrukcja 3D embrionów kontrolnych E17.5 wykazała, że są to zastawki trójdzielne zastawki płucnej i aorty (Ryc. 4, A i B oraz Supplemental Videos 4 i 5), podczas gdy Mef2c-AHF-Cre, mutanty z miotu DNMAML wykazały dysmorficzne, zagęszczone płaty zastawki (Rysunek 4C i dodatkowe wideo 6). Mutanty często wyświetlały nieregularne warstewki z anomaliami podobnymi do dwupłatopodobnych (zwróć uwagę na zastawkę płucną z 2 spoidłami na ryc. 4C i Supplemental Video 6). Kwantyfikacja średniej objętości płatków płatka zastawki dwunastniczej zarodków E17.5 potwierdziła powiększenie zmutowanych listków. Mef2c-AHF-Cre; płaty zastawki półksiężycowej DNMAML były 2,2 razy większe niż ulotki z miotu WT (6,318,525. 158,618. M3 [n = 3 zarodki, 5 zaworów] w porównaniu z 2 906,227. 275,426. M3 [n = 3 zarodki, 5 zaworów]; P = 0,0001). Figura 4 Hamowanie nerwowe w drugim sercu powoduje dysmorficzne płaty zastawki półksiężycowej. 3D rekonstrukcje obrazów generowanych przez OPT zaworu kontrolnego E17.5 (WT), zastawki aortalnej (A), zastawki aortalnej (B) i Mef2c-AHF-Cre, płatków zastawki półksiężycowej DNMAML (C). Zwróć uwagę na pogrubione zastawki aortalne i zastawki dwupłatkowej płucnej w mutancie (C), które demonstruje podwójną prawą komorę. Barwienie H & E przekrojów E17.5 kontrolnych (WT) pulmonicznych (D) i zastawek aortalnych (E) pokazuje delikatne, cienkie listki. Jednakże, Islet1Cre / +; DNMAML (F) i Mef2c-AHF-Cre; ulotki półmostkowe DNMAML (G i H) są pogrubione i mają nierówne rozmiary
[patrz też: koszt rezonansu magnetycznego, kimura chwyt, ciasto marchewkowe wegańskie ]
[hasła pokrewne: koszt rezonansu magnetycznego, dieta przyspieszająca metabolizm jadłospis, ciasto marchewkowe wegańskie ]