Sercowy grzbiet nerwowy koordynuje przebudowę i funkcjonalne dojrzewanie zastawek półksiężycowatych myszy cd

Przekrojowe obrazy H & E przez ulotki zastawki aortalnej embrionów E16.5 Pax3 + / + i Pax3Cre / + (G i H) i pająka Pax3Cre / Cre (I) pokazują zagęszczone, nierówne wielkości ulotki u mutanta. Pokazano przykłady zaworu tłokowego (F) i podwójnej komory prawej (I). Zmodyfikowane odbarwianie pentachromem Movata ujawnia odkładanie macierzy pozakomórkowej (niebieski) w kontrolnych płatkach zastawki semilunarnej E16.5 (J i K) i zarodkach Pax3Cre / Cre (L), które wykazują wzrost pozakomórkowej macierzy w porównaniu z kontrolnymi ulotkami. Obrazy J. L o większym powiększeniu są pokazane jako M. O. AV, zastawka aortalna; PV, zastawka płucna; TrV, zawór truncalowy. Jasność i kontrast obrazów OPT zostały skorygowane za pomocą oprogramowania OsiriX. Pręty skali: 100 .m. Analiza histologiczna wykazała, że zawory półksiężycowate mają cienkie, wyraźne krawędzie zarówno w embrionach kontrolnych Pax3 + / +, jak i Pax3Cre / + w E16.5, natomiast pająki z Pax3Cre / Cre wykazały ciężkie dysmorficzne i pogrubione płatki zastawki półksiężycowatej o nierównych rozmiarach (Ryc. 1, D. I) . Zastawki przedsionkowo-komorowe, które nie otrzymują wkładu grzebienia nerwowego, wydają się normalne w tych zarodkach (Suplementalna Figura 1). Bardziej szczegółowa analiza ujawniła normalną architekturę trilaminarną i uporządkowaną komórkowość w kontrolnych ulotkach zarodkowych zastawki aortalnej, podczas gdy zmutowane zarodki wykazały wzrost macierzy pozakomórkowej w zmutowanych płatkach zastawki (Figura 1, J. O). Utrata Pax3 skutkuje nieprawidłową funkcją zastawki półksiężycowatej. Oceniliśmy funkcję zastawki półksiężycowej za pomocą echokardiografii wewnątrzmacicznej przy E16.5. Zarodki z 3 miotów myszy ciężarnych samic Pax3Cre / + w czasie, zaimpregnowanych przez samca Pax3Cre / +, zbadano za pomocą analizy doplera w fali dopplerowskiej aorty pod kątem dowodu odwrócenia przepływu. Badania przeprowadzono przed genotypowaniem zarodków, a badania i interpretacja obrazu wykonano w sposób zaślepiony. Wszystkie zarodki Pax3 + / + (11/11) i Pax3Cre / + (16/16) wykazały brak wykrywalnego przepływu zwrotnego poza śladowe ilości związane z zamknięciem zastawki (Figura 2, A i B). Wszystkie zarodki Pax3Cre / Cre (5/5) wykazywały co najmniej umiarkowaną do ciężkiej niewydolność aorty, charakteryzującą się obecnością strumienia zwrotnego przez cały rozkurcz (Figura 2, C i D). W niektórych badaniach odnotowano niewydolność aortalną jako najczęstszą nieprawidłowość zastawkową u ludzi z dwupłatkową zastawką aortalną (37). Figura 2 Utrata Pax3 prowadzi do niedomykalności zastawki aortalnej. Analiza dopplerowska fali tętna z aorty zarodków kontrolnych E16.5 Pax3 + / + i Pax3Cre / + nie wykazuje znaczącej niedomykalności aortalnej (A i B). Pax3Cre / Cre z miotu wykazują co najmniej umiarkowanie ciężką niewydolność aorty (grot strzałki w C i D). Groty strzałek wskazują na przepływ zwrotny w zmutowanych zarodkach. Wady zastawki półksiężycowej u mutantów drugiego pola Notch Notch. Badaliśmy ekspresję markerów grzebienia nerwowego w kontrolnych i mutantów Pax3Cre / Cre podczas opracowywania poduszek wypływu. Sema3C jest silnie wyrażany przez pogrążeniowy grzejący nerw nerwowy serca (38). Kontrolne zarodki wykazały 2 skupiska komórek nerwowych grzebienia w poduszkach dróg wypływowych, jak zauważono poprzednio (7, 10, 39), przy E11.5 przez hybrydyzację in situ (Figura 3A). Komórki te znajdują się na przedzie krawędzi kolumn komórek nerwowych atakujących OFT. Jednak zarodki Pax3Cre / Cre wykazywały wyraźną redukcję w domenie ekspresyjnej Sema3C w poduszkach dróg wypływowych (Figura 3B). Zmutowane zarodki utrzymywały ekspresję Sema3C mięśnia sercowego w ściance mięśnia sercowego przewodu odpływowego, demonstrując czułe wykrywanie ekspresji Sema3C przez hybrydyzację in situ w zmutowanych zarodkach. Dane te są zgodne zarówno ze zmniejszeniem liczby komórek grzebienia nerwowego serca, jak i zmienionymi charakterystykami migracji, jak opisano wcześniej w mutantach Splotch (34, 36, 40). Figura 3Anormalna migracja grzebienia nerwowego w grzebieniu nerwowym i mutantach drugiego pola serca. Hybrydyzacja in situ dla markera grzebienia nerwowego Sema3C z E11.5 przekrojów wieńcowych przez poduszeczki wypływu z kontroli (WT) (A), Pax3Cre / Cre (B), Islet1Cre / +; DNMAML (C) i Mef2c-AHF-Cre Zarodki DNMAML (D). Hybrydyzacja in situ dla markera grzebienia nerwowego PlexinA2 z E11.5 wieńcowych przekrojów kontrolnych (WT) (E), Pax3Cre / Cre (F), Islet1Cre / +; DNMAML (G) i Mef2c-AHF-Cre; DNMAML (H) zarodki. AP2. immunohistochemia przekrojów wieńcowych poduszek wypływowych z kontroli E10.5 (WT) (I) i Mef2c-AHF-Cre, zarodków DNMAML (J). Kropkowane linie w A, E i I obejmują regiony zajęte przez komórki grzebienia neuronowego wyrażające odpowiednio Sema3C, PlexinA2 i AP2a. Immunochirurgia GFP i Islet1 przekrojów przez przewód odpływowy i mezenialna gardła embrionów E9.5 Pax3Cre / +, Z / EG (K i L)
[więcej w: goździki właściwości lecznicze, trening pod sztuki walki, ankos zapasy warszawa ]
[więcej w: łojotokowe zapalenie skóry głowy wypadanie włosów, najlepsza odzywka do rzes, masaż leczniczy kręgosłupa ]