Sercowy grzbiet nerwowy koordynuje przebudowę i funkcjonalne dojrzewanie zastawek półksiężycowatych myszy ad 8

Ekspresja Bmp4 w grzebieniu nerwowym serca jest zmniejszona po hamowaniu Notch w drugim polu serca. Zatem Bmp4 jest atrakcyjnym kandydatem jako mediator apoptotycznej sygnalizacji z grzebienia nerwowego, który może reagować na sygnały z drugiego pola serca (15). Rzeczywiście, Bmp4 jest wymagany do prawidłowej przebudowy łuku aorty i opracowania półksiężycowatego zastawki (59, 60). Jednak usunięcie Bmp4 w grzebieniu nerwowym (przy użyciu Wnt1-cre) nie powoduje nieprawidłowych zastawek półksiężycowatych (dane nie pokazane). Wykazano, że przekazywanie sygnału Msx jest ważnym regulatorem apoptozy szczytu nerwowego (61), a geny Msx mogą funkcjonować w dół od sygnalizacji Bmp. Jednakże nie obserwowaliśmy spójnych zmian w ekspresji Msx1 lub Msx2 w późnych stadiach zawałów mutanta Notch (dane nie pokazane). Wreszcie, sygnalizacja MMP była przedmiotem intensywnych badań w jej roli w zastrzyku dwupłatkowej zastawki aortalnej i tworzeniu tętniaka aortalnego. Konkretnie, poziomy MMP-2 i MMP-9 są zmienione w badaniach in vitro i ex vivo dwupłatkowej zastawki aortalnej i tętniaków (53, 62, 63). Należy jednak wyjaśnić, czy nieprawidłowe poziomy MMP-2 lub MMP-9 są przyczynowe w fenotypie lub wskaźniku choroby. Ponadto interesujące będzie rozszyfrowanie przestrzennej i czasowej ekspresji sygnalizacji MMP podczas rozwoju półksiężycowatego zaworu. Identyfikacja sygnałów apoptotycznych pochodzących z neuronowego grzebienia lub sygnałów, które są wymagane do przebudowy półksiężycowatego zaworu, będzie przedmiotem przyszłych badań, podobnie jak charakterystyka sygnałów odpowiedzialnych za zmienioną produkcję macierzy pozakomórkowej. Podsumowując, nasze dane sugerują, że grzebień nerwowy stanowi pouczający sygnał do przebudowy zastawek półksiężycowatych i podkreśla znaczenie interakcji tkanka-tkanka między drugim polem serca, grzebieniem nerwowym i mezenchymalną poduszką wsierdzia. Eksperymentalna demonstracja roli grzebienia nerwowego w patofizjologii wrodzonych zaburzeń zastawki półksiężycowatej stanowi mechanizm rozwojowy wyjaśniający związek wad zastawek aortalnych i płucnych z nieprawidłowościami naczyniowymi łuku aorty. Metody Myszy. Myszy Pax3Cre / + były hodowane na mieszanym tle CD1. Mysie myszy Pax3Cre, Islet1Cre, Mef2c-AHF-Cre i DNMAML zostały genotypowane jak opisano wcześniej (40). Zwierzęta z miotu były porównywane we wszystkich eksperymentach, o ile nie zaznaczono inaczej. Wszystkie protokoły dotyczące zwierząt zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowania Uniwersytetu w Pensylwanii. James F. Martin (Texas A & M University, College Station, Texas, USA) dostarczył embriony Wnt1-cre; Bmp4flox / flox. Histologia, immunohistochemia i hybrydyzacja in situ. Próbki utrwalono przez noc (embriony E9.5 do E11.5) lub przez 48 godzin (embriony E16.5 do E17.5) z 4% paraformaldehydem i odwodniono przez serię etanolu. Próbki zostały następnie zatopione w parafinie i podzielone na sekcje. Przeciwciała stosowane do immunobarwienia były mysimi monoklonalnymi anty-AP2. (katalog 5E4, badanie rozwojowe Hybridoma Bank), królicze poliklonalne anty-GFP (katalog A11122, Invitrogen) i mysi monoklonalny antyfosfolon H3 (katalog 9706L, Cell Signaling Technology). Barwienie TUNEL przeprowadzono stosując standardowe protokoły. Radioaktywne hybrydyzacje in situ przeprowadzono stosując wcześniej opisane sondy dla Sema3C (38) i PlexinA2 (15). Immunohistochemię i obrazy hybrydyzacji in situ analizowano za pomocą Adobe Photoshop. Jasność i kontrast zostały zmienione identycznie w obrazach kontrolnych i zmutowanych we wszystkich przypadkach przy użyciu Adobe Photoshop. H & E i zmodyfikowane barwienie metodą pentachronu Movata przeprowadzono stosując standardowe protokoły. Kwantyfikację komórek fosfo-histonu-H3 +, DAPI + i TUNEL + przeprowadzono przy użyciu oprogramowania Metamorph. W analizie wykorzystano obrazy potrójnego filtra w celu wykluczenia niespecyficznego sygnału, a ulotki śledzono z obrazów w sposób zaślepiony na genotyp. Echokardiografia wewnątrzmaciczna. Ciężarne samice myszy znieczulono przez inhalację 2% izofluranu w szklanej komorze i 1% do 1,5% izofluranu za pomocą stożka nosowego w celu podtrzymania znieczulenia. Myszy zobrazowano na ogrzewanej platformie, monitorując temperaturę ciała. Badanie echokardiograficzne przeprowadzono przy użyciu Vevo 770 (VisualSonics) z sondą liniową 30 MHz (RMV 707). Mapę pozycji zarodków, skonstruowanych podczas każdego badania, użyto do analizy embrionów po zakończeniu badania pod kątem genotypowania. Do oceny niewydolności aortalnej wykorzystano analizę dopplerowską aorty metodą fali tętna. OPTOWAĆ. Zarodki zbierano do zimnego PBS, a serce i wielkie tętnice wycinano. Narządy utrwalono przez noc w 4% paraformaldehydzie
[więcej w: techniki mma, trening pod sztuki walki, nr na pogotowie ratunkowe ]
[przypisy: zapytaj trenera, mma core, mmacore ]