Sercowy grzbiet nerwowy koordynuje przebudowę i funkcjonalne dojrzewanie zastawek półksiężycowatych myszy ad 5

Zmutowane ulotki przedstawiają wzrost odkładania macierzy pozakomórkowej. F i K pokazują zarodki z przetrwałym tętnem, a G, H, L i M pokazują zarodki z podwójną komorą prawej komory. Jasność i kontrast obrazów OPT zostały skorygowane za pomocą oprogramowania OsiriX. Pręty skali: 100 .m. Po analizie histologicznej kontrolne zarodki wykazały cienkie, delikatne płateczki zastawki półksiężycowej (Ryc. 4, D i E). Przeciwnie, oba mutanty Islet1Cre / +, DNMAML (Figura 4F) i Mef2c-AHF-Cre, DNMAML (Figura 4, G i H) wykazywały nienormalne płatki zastawki półksiężycowej, uderzająco podobne do zwierząt Pax3Cre / Cre. Ulotki zastawki odpływowej były nieprawidłowe niezależnie od powiązanego odcinka odpływu i nieprawidłowości w łuku aorty, takich jak truncus arteriosus lub podwójnie wypróżniona komora prawostronna. Kontrolne ulotki posiadały normalną strukturę macierzy pozakomórkowej trójcy (Figury 4, I i J), ale mutanty wykazywały nadmiar pozakomórkowej matrycy (Figura 4, K. M). Nie wpłynęło to na płaty zastawki przedsionkowo-komorowej (Uzupełniająca figura 1). W celu oceny przydatności zastawki zastosowano echokardiografię wewnątrzmaciczną E17.5 Islet1Cre / +, DNMAML lub Mef2c-AHF-Cre; Wszystkie 6 zarodków kontrolnych (Witter z miotu WT) wykazywało trywialną lub żadną niewydolność aorty (Figura 5A). Jednak każde z 4 zarodków Islet1Cre / +; DNMAML wykazywało co najmniej umiarkowaną lub ciężką niewydolność aorty (Figura 5B). Podobnie zbadano 5 dodatkowych kontroli (zarodek z miotu WT) ze znaczną niewydolnością aortalną, podczas gdy wszystkie 4 mutacje Mef2c-AHF-Cre, mutanty DNMAML wykazywały co najmniej umiarkowaną do ciężkiej niewydolność aorty (Figura 5, C i D). Refluksowy strumień obecny w rozkurczu określa się jako umiarkowaną do ciężkiej niewydolność aorty. W związku z tym zastawki półksiężycowate zarodków, w których przekazywanie sygnałów Notch jest hamowane w drugim polu serca, są nieprawidłowości morfologiczne i funkcjonalne. Rycina 5 Hamowanie sygnalizacji Notch w drugim polu serca powoduje niedomykalność zastawki aortalnej. Analiza Dopplera fali tętna z aorty kontroli E17.5 (A), Islet1Cre / +, DNMAML (B), kontroli (C) i Mef2c-AHF-Cre, DNMAML (D) zarodków. Kontrolne zarodki to mioty WIT z odpowiednich mutantów. Groty strzałek wskazują na przepływ zwrotny w zmutowanych zarodkach. Nieprawidłowe zastawki półkurczowe są związane z niedoborem apoptozy i przebudowy. Pochodne grzebienia nerwowego można zidentyfikować w poduszkach nabłonka przewodu pokarmowego już w E10,5, chociaż niewiele pochodnych pozostaje przy E17.5 (Suplementowa Figura 2). Rozwijające się płaty zastawki półksiężycowatej zachowują znaczny udział pochodnych grzebienia nerwowego w E13,5, ale przez E16.5 następuje znaczny spadek. Według E17.5, płaty zastawki półksiężycowej są prawie pozbawione pochodnych grzebienia nerwowego (Suplementowa Figura 2). W mutantach z grzebieniem nerwowym i mutantach z drugim polem serca z defektami w postaci grzebienia nerwowego, wypływy z wnętrza wsierdzia są początkowo niekomórkowe, co najmniej częściowo z powodu niedoboru mezenchymalnych pochodnych neuronów grzebienia (15). Jednak paradoksalnie, te mutanty wykazują hiperkomórkowe zastawki półksiężycowe w późnym okresie ciąży (ryc. i 4). Ponieważ normalna późna remodeling zastawek półksiężycowatych jest związana ze zmniejszeniem proliferacji mezenchymalnej i wzrostem apoptozy, zbadaliśmy te parametry w normalnych i zmutowanych zarodkach podczas późnej ciąży (E16.5. E17.5). Pax3 + / + i Pax3Cre / + kontrolne mezenchymalne płatek zastawki półksiężycowej wykazywały odpowiednio 0,51% i 0,53% komórek TUNEL + (n = 3 zarodki dla każdego z genotypów, odpowiednio 6495 i 7314 z komórek mezenchymalnych) w E16.5. Jednakże, zarodki zarodków Pax3Cre / Cre wykazywały statystycznie istotny niedobór apoptozy (0,17% komórek TUNEL +, zliczono 8749 komórek mezenchymalnych, P <0,005 w porównaniu z genotypem kontrolnym, Figura 6A i Suplementowa Figura 3). Nie wykryliśmy istotnej statystycznie różnicy w proliferacji ocenianej jako procent komórek fosfohistonu H3 + (Pax3Cre / +: 0,40%. 0,20 vs. Pax3Cre / Cre: 0,49%. 0,14, P = 0,74). Podobnie, E17.5 Mef2c-AHF-Cre +, płaty zastawki półksiężycowej DNMAML wykazywały statystycznie istotny spadek apoptozy w porównaniu z kontrolnymi współlokatorami (0,38% komórek TUNEL + w kontroli DNMAML [n = 3 zarodki, zliczono 15445 komórek] w porównaniu z 0,09% TUNEL + komórki w Mef2c-AHF-Cre, DNMAML [n = 3 zarodki, zliczono 40707 komórek, P = 0,0004, Figura 6B i Suplementowa Figura 3]), podczas gdy nie odnotowano statystycznie istotnej zmiany w fosfo-histonowych komórkach H3 + [hasła pokrewne: masaż nuru na czym polega, zapytaj trenera, mmacore ] [przypisy: powiększone węzły chłonne w jamie brzusznej, goździki właściwości lecznicze, mleko w proszku dla dzieci ]