Uszkodzenie DNA jest nową odpowiedzią na subiektywne uszkodzenie indukowane przez C5b-9a dopełniacza w podocytach czesc 4

Na koniec, w celu określenia wpływu hamowania ERK-1 i -2 na uszkodzenie DNA, mierzono uszkodzenie DNA (jak opisano powyżej) w komórkach eksponowanych na U0126, po indukcji sub5 wego C5b-9. Wyniki Eksponowanie podocytów na Ab i dopełniacz wywołuje atak subiektywny Występował wzrost poziomu LDH o 4% zarówno u myszy jak i szczurów, podocytów eksponowanych na Ab i źródło dopełniacza (surowica C +) w porównaniu z komórkami kontrolnymi narażonymi na Ab i niedobór PVG-C6a ( C.) Surowica (dane nie pokazane). Podobnie nastąpił wzrost uwalniania LDH o 4% w RMC eksponowanych na surowicę anty-Thy1 Ab i C + w porównaniu z komórkami kontrolnymi eksponowanymi na Ab i C. surowica (dane nie pokazane). Tak więc indukowaliśmy sublysis (<5%) na podocytach myszy i szczurów oraz w RMC. Read more „Uszkodzenie DNA jest nową odpowiedzią na subiektywne uszkodzenie indukowane przez C5b-9a dopełniacza w podocytach czesc 4”

Uszkodzenie DNA jest nową odpowiedzią na subiektywne uszkodzenie indukowane przez C5b-9a dopełniacza w podocytach cd

Podocyty pozostawiono do wzrostu przez 3. 4 dni w celu włączenia 3H-tymidyny do DNA. Po stymulacji za pomocą Ab i C + lub C. surowicy, podocyty inkubowano w pożywce przez 30 minut do 24 godzin, a następnie rozpuszczono stosując bufor do lizy. KCl (12 M) dodano do zlizowanych komórek i inkubowano w temperaturze 65 ° C przez 10 minut, zamrażano przez 5 minut, a następnie odwirowano przy 3200 g w celu oddzielenia wytrąconego DNA chromatyny z uszkodzonego DNA (supernatant). Read more „Uszkodzenie DNA jest nową odpowiedzią na subiektywne uszkodzenie indukowane przez C5b-9a dopełniacza w podocytach cd”

Uszkodzenie DNA jest nową odpowiedzią na subiektywne uszkodzenie indukowane przez C5b-9a dopełniacza w podocytach ad

Sposoby wytwarzania transgenicznych myszy H-2Kb-tsA58 i izolowania podocytów z nerek H-2Kb-tsA58 opisano wcześniej (13). Gdy te mysie podocyty hoduje się w warunkach zezwalających na wzrost (33 ° C i pożywki uzupełnione 50 | jg / ml mysiego IFN-a), proliferują i utrzymują jednorodną, brukowatą morfologię. W przeciwieństwie do tego, gdy hoduje się je w warunkach różnicujących (37 ° C, brak IFN-y), przestają one proliferować, opracowują złożoną sieć procesów i przyjmują typowo zróżnicowany i postmitotyczny fenotyp. Te ostatnie warunki wykorzystaliśmy do zaprezentowanych tu badań. Komórki mezangialne. Read more „Uszkodzenie DNA jest nową odpowiedzią na subiektywne uszkodzenie indukowane przez C5b-9a dopełniacza w podocytach ad”

Uszkodzenie DNA jest nową odpowiedzią na subiektywne uszkodzenie indukowane przez C5b-9a dopełniacza w podocytach

W odpowiedzi na uraz, w którym pośredniczy AB-dopełniacz, podocyty mogą ulegać lizie, apoptozie lub, gdy są eksponowane na podmineryczne (<5% liza) ilości C5b-9, ulegają aktywacji. Po wprowadzeniu sub-przestrzennych ilości C5b-9 następuje wzrost szlaków sygnałowych i synteza czynnika wzrostowego oraz uwalnianie proteaz, utleniaczy i innych cząsteczek. Pomimo wzrostu syntezy DNA, sub-metylo-C5b-9 jest związany z opóźnieniem w progresji fazy G2 / M w podocytach. W tym miejscu indukowaliśmy subtelne uszkodzenie C5b-9 in vitro przez wystawienie hodowanych podocytów szczurzych lub zróżnicowanych postocytotycznych podocytów myszy na Ab i źródło komplementacji; badaliśmy także pasywny model zapalenia nerek Heymann w doświadczalnej nefropatii błoniastej u szczurów. Głównym odkryciem było to, że podmiejskie uszkodzenie indukowane C5b-9a powodowało wzrost uszkodzenia DNA w podocytach, zarówno in vitro, jak i in vivo. Read more „Uszkodzenie DNA jest nową odpowiedzią na subiektywne uszkodzenie indukowane przez C5b-9a dopełniacza w podocytach”

Zespół długiego QT, zespół Brugadów i choroba układu przewodzącego są powiązane z pojedynczą mutacją kanału sodowego ad

Fosforylacja zależna od PKC jest wymagana do modulacji zależnej od PKA kanału Na + (16). Wyraziliśmy. 1500 i pokrewne mutacje K1500E, K1500Q i. K1499 w komórkach 293-EBNA. Funkcjonalne zaburzenia w bramkowaniu kanałowym mogą uwzględniać wszystkie trzy fenotypowe warianty mutacji. Read more „Zespół długiego QT, zespół Brugadów i choroba układu przewodzącego są powiązane z pojedynczą mutacją kanału sodowego ad”

Zespół długiego QT, zespół Brugadów i choroba układu przewodzącego są powiązane z pojedynczą mutacją kanału sodowego

Funkcja 12 dodatnich ładunków w 53-resztowym sprzężeniu międzyosobniczym III / IV kanału mięśnia sercowego Na + jest niejasna. Zidentyfikowaliśmy rodzinę czterech pokoleń, w tym 17 nosicieli genów z długim zespołem QT, zespołem Brugadów i chorobą układu przewodzenia z delecją lizyny 1500 (. K1500) w łączniku. Trzech członków rodziny zmarło nagle. Zbadaliśmy funkcjonalne konsekwencje tej mutacji przez pomiar całych i jednokanałowych prądów w komórkach 293-EBNA wyrażających dziki i zmutowany kanał K1500. Read more „Zespół długiego QT, zespół Brugadów i choroba układu przewodzącego są powiązane z pojedynczą mutacją kanału sodowego”

Uszkodzenie DNA jest nową odpowiedzią na subiektywne uszkodzenie indukowane przez C5b-9a dopełniacza w podocytach ad 8

Drugim ważnym odkryciem w obecnym badaniu było to, że podmiejskie uszkodzenie wywołane C5b-9a zwiększało poziomy p53 w podocytach myszy i szczura in vitro oraz w eksperymentalnej błoniastej nefropatii in vivo. Do tej pory wzrost poziomów p53 opisano tylko w odpowiedzi na uszkodzenie wywołane przez naświetlanie UV i niektóre czynniki uszkadzające DNA (28). Możemy teraz dodać subtelne uszkodzenia DNA do listy obrażeń zwiększających poziom p53. Inhibitor CDK p21 hamuje progresję cyklu komórkowego w G1 / S i G2 / M (29), a p21 jest zwiększone w podocytach u szczurów PHN (19). Proliferacja podocytów jest znacznie zwiększona u myszy z p21-null z zahamowanym kłębuszkowym zapaleniem nerek (30). Read more „Uszkodzenie DNA jest nową odpowiedzią na subiektywne uszkodzenie indukowane przez C5b-9a dopełniacza w podocytach ad 8”

Uszkodzenie DNA jest nową odpowiedzią na subiektywne uszkodzenie indukowane przez C5b-9a dopełniacza w podocytach ad 7

Zmierzyliśmy ERK natychmiast (0. 45 min) i później (1. 20 h) po uszczerbku na zdrowiu. Nastąpił dwufazowy wzrost fosforylowanych poziomów ERK w ciągu 15 minut i ponownie po 8 godzinach (Figura 6b). Wzrost nie był spowodowany nierównomiernym obciążeniem białkiem, ponieważ całkowite poziomy ERK-1 i -2 były podobne we wszystkich ścieżkach, podobnie jak białko utrzymujące, aktynę (dane nie pokazane). Read more „Uszkodzenie DNA jest nową odpowiedzią na subiektywne uszkodzenie indukowane przez C5b-9a dopełniacza w podocytach ad 7”

Uszkodzenie DNA jest nową odpowiedzią na subiektywne uszkodzenie indukowane przez C5b-9a dopełniacza w podocytach ad 6

Immunobarwienie p53 nie zostało wykryte w kłębuszkach kontrolnych. Przeciwnie, zaobserwowano wyraźny wzrost immunobarwienia p53 u szczurów PHN w podocytach. Figura 5 pokazuje również analizę Western blot przeprowadzoną na białku wyekstrahowanym z izolowanych kłębuszków nerkowych i potwierdza, że poziomy białka p53 były zwiększone w kłębuszkach z szczurów PHN w porównaniu ze szczurami kontrolnymi. Figura 5 Białka uszkadzające DNA zwiększają szczury PHN. Immunobarwienia p53 (a), p21 (c) i fosforylowanego CHK-2 (e) nie wykryto u szczurów kontrolnych, którym wstrzyknięto normalną surowicę owczą. Read more „Uszkodzenie DNA jest nową odpowiedzią na subiektywne uszkodzenie indukowane przez C5b-9a dopełniacza w podocytach ad 6”

Zespół długiego QT, zespół Brugadów i choroba układu przewodzącego są powiązane z pojedynczą mutacją kanału sodowego ad 7

Liczby kanałów w plastrze, oszacowane na podstawie nagrań uzyskanych przy niskim zysku, wynosiły 14 (typ dziki) i 16 (. 1500). Te oszacowania znajdują się na dolnym limicie, ponieważ prawdopodobieństwo, że kanał otworzy się podczas próby, jest zawsze mniejsze niż 1. Początkowy prąd skierowany do wewnątrz nasyca wzmacniacz i został obcięty, jak pokazano na rys. 7, d i e. Read more „Zespół długiego QT, zespół Brugadów i choroba układu przewodzącego są powiązane z pojedynczą mutacją kanału sodowego ad 7”