Miejsce i mechanizm działania leptyny w postaci gryzoni wrodzonej lipodystrofii cd

Wątroby i mięśnie wycięto po 5 minutach i zamrożono w ciekłym azocie. Cząsteczki sygnałowe insuliny analizowano jak opisano poprzednio (23). Test PI3K i test kinazy AKT. Homogenaty wątroby i mięśni ze stymulacji insuliny in vivo zastosowano do oznaczenia aktywności kinazy PI3K i AKT, jak opisano wcześniej (26). Analiza statystyczna. Wszystkie dane są wyrażone jako średnie. SE. Do ustalenia istotności użyto niesparowanego testu ucznia. Wyniki Podawanie leptyny wewnątrz komórkowej koryguje nieprawidłowości metaboliczne związane z lipodystrofią. Podajemy rekombinowaną mysią leptynę (12 ng / h) lub PBS icv myszom aP2-nSREBP-1c przez 12 dni (20) (Figura 1). W oddzielnych badaniach zwierzęta z lipodystrofią były leczone większą dawką podskórnej leptyny (200 ng / h przez 12 dni) lub PBS. Ta dawka podskórna wykazała wcześniej, że w pełni koryguje defekty metaboliczne u myszy z lipodystrofią (9). Lepeptyna wewnątrzkomorowo-mózgowa (12 ng / h) nie zmieniała poziomów leptyny w osoczu u myszy z lipodystrofią (Figura 1a). U zwierząt traktowanych leptyną icv spożycie pokarmu zmniejszyło się o 26,2% (Figura 1b), a masa ciała była zmniejszona o 17,3% (Figura 1c) w porównaniu z kontrolnymi traktowanymi PBS. Ta dawka leczenia leptyną znacznie poprawiła wrażliwość na insulinę, ponieważ zarówno poziom glukozy w osoczu, jak i insulina w osoczu uległy znacznemu obniżeniu (ryc. 1, d i e). W końcu, leczenie leptyną icv zmniejszyło poziom trójglicerydów w wątrobie siedmiokrotnie (Figura 2a) i zmniejszoną masę wątroby o 67,5% w stosunku do kontrolnych traktowanych PBS (Figura 2b). Analiza histologiczna potwierdziła, że traktowanie icv korygowało stłuszczenie wątroby myszy P2-nSREBP-1c (Figura 2, c i d). Jako dodatkową kontrolę potraktowaliśmy osobną grupę myszy aP2-nSREBP-1c z 12 ng / h obwodowej leptyny, taką samą dawkę stosowano w leczeniu icv. Ta dawka nie miała wpływu na żaden z parametrów przedstawionych na Figurach i 2 (dane nie pokazane). We wszystkich przypadkach leptyna ic była tak silna lub silniejsza niż znacznie wyższa dawka leptyny obwodowej w korygowaniu zaburzeń metabolicznych związanych z lipodystrofią. Dane te sugerują, że wpływ leptyny na działanie insuliny, cukrzycę i stłuszczenie wątroby w lipodystrofii może odbywać się wyłącznie za pośrednictwem OUN. Ryc. Wpływ leptyny centralnej i obwodowej na lipodystrofię gryzoni. Podano kilka parametrów metabolicznych u myszy transgenicznych aP2-nSREBP-1c leczonych za pomocą icw PBS, leptyny icv (12 ng / h) i leptyny podskórnej (200 ng / h). (a, d, e) Poziomy leptyny, glukozy i insuliny w osoczu. (b) Średni dzienny pobór pokarmu w trakcie 12-dniowego leczenia. (c) Procentowa zmiana masy ciała. Stuprocentowa zmiana wskazuje wagę myszy w dniu wstawienia pompy. Słupki błędu wskazują SE dla czterech myszy na grupę dla każdego leczenia. * P <0,05, leptyna icv vs. icv PBS. Figura 2Korygacja stłuszczenia wątroby z centralnym leczeniem leptyną. (a) Zawartość triglicerydów w wątrobie. (b) Masa wątroby w gramach. Słupki błędu wskazują SE dla czterech myszy na grupę dla każdego leczenia. * P <0,05, leptyna icv vs. icv PBS. (c i d) Reprezentatywne wycinki wątroby od myszy traktowanych za pomocą PBS icv leptyny. Oryginalne powiększenie, × 200; paski skali: 100 .m. Kilka genów wątrobowych zaangażowanych w metabolizm lipidów i glukozy jest podobnie modyfikowanych przez icv i podskórną leptynę. Następnie porównaliśmy profile ekspresji genów wątroby u myszy P2-nSREBP-1c i myszy WT zi bez leczenia obwodowego lub centralnego leptyną. mRNA dla kilku enzymów zaangażowanych w syntezę kwasów tłuszczowych, glikolizę i glukoneogenezę zostały uprzednio wykazane różnicowo ekspresjonowane w wątrobach myszy P2-nSREBP-1c i znormalizowane przez obwodowe leczenie leptyną (27). Zbadaliśmy profile ekspresji grupy genów regulujących metabolizm lipidów i glukozy po podaniu centralnym lub obwodowym leptynie (Tabela 1). Dla każdego z tych genów odpowiednia lub większa odpowiedź była widoczna po leczeniu limfocytami. Na przykład, enzym jabłkowy i syntaza kwasów tłuszczowych, enzymy zaangażowane w syntezę kwasów tłuszczowych, były podwyższone odpowiednio o 3,0 i 3,7 razy w aP2-nSREBP-1c w stosunku do wątroby WT. Te dwa geny uległy w dół 7,0- i 4,3-krotnym zmniejszeniu, odpowiednio po podaniu leptyny przez icv, w porównaniu odpowiednio z 2,6-krotnym i dwukrotnym wzrostem po leczeniu obwodowym leptyną (w porównaniu z transgenicznymi wątrobami traktowanymi PBS). W wątrobie aP2-nSREBP-1c, kinaza pirogronianowa, enzym glikolityczny i glukozo-6-fosfataza, enzym glukoneogenny, ulegały zwiększonej regulacji odpowiednio o 3,0 i 3,3 razy w stosunku do wątroby WT. Leczenie leptyną komorowo-obwodową obniżyło te geny odpowiednio o 7,0- i 4,3-krotnie, a obwodowe podanie leptyny obniżyło je odpowiednio o 2,5- i 1,5-krotne (w porównaniu z transgenicznymi wątrobami traktowanymi PBS) [patrz też: koszt rezonansu magnetycznego, ankos zapasy warszawa, trening pod sztuki walki ] [patrz też: mleko w proszku dla dzieci, centermed słoneczna tarnów, fundacja dzieciom zdążyć z pomocą logowanie ]