Hamowanie PKC łagodzi fenotyp serca w mysim modelu dystrofii miotonicznej typu 1 czesc 4

Wyniki wskazują, że podawanie Ro-31-8220 poprawia wydłużenie PR u myszy eksprymujących EpA960. RNA. Ryc. 3Ro-31-8220 łagodzi przewodzenie serca i nieprawidłowości skurczowe. (A) Reprezentatywne zapisy EKG zarejestrowane przed i po wywołaniu EpA960 (RNA) RNA u myszy leczonych z lub bez Ro-31-8220. Ro-31-8220 podawany codziennie przez 2 dni przed indukcją EpA960. RNA (PRE) nie wpływał na wyjściowe EKG myszy przed indukcją EpA960 (RNA) RNA. Reprezentatywne zapisy EKG po indukcji EpA960 (R) RNA (POST) u myszy, którym podano pozorowane iniekcje soli fizjologicznej (TAM) lub Ro-31-8220 (TAM-Ro-31-8220). Odstępy PR są wskazywane powyżej trasowań. Paski skali pod wykresem wskazują 100 ms. (B) śledzenie EKG pokazujące blok serca trzeciego stopnia, z rytmem mieszania z węzłów, od myszy w grupie TAM. Pasek skali: 500 ms. (C) Procent frakcyjnego skracania w grupach TAM (n = 9) i TAM-Ro-31-8220 (n = 11) zwierząt EpA960 / MCM przed i po iniekcji indukcyjnej EpA960 (R) RNA (średnia . SEM). * P <0,05 przed i po indukcji EpA960. RNA; P <0,05 zi bez podawania Ro-31-8220 po indukcji EpA960. RNA. Tabela Analiza EKG zwierząt leczonych z lub bez Ro-31-8220, przed i po indukcji EpA960. RNA Badaliśmy również, czy podawanie Ro-31-8220 polepsza kurczliwość u myszy eksprymujących EpA960 (R) RNAa, stosując echokardiografię do zmierzyć skrócenie frakcji. Podawanie Ro-31-8220 nie miało wpływu na funkcję lewej komory przed wywołaniem ekspresji RNA (Figura 3C). Dwadzieścia pięć dni po indukcji EpA960 (R) RNA myszy otrzymujące injekcje solanki wykazywały statystycznie znaczące zmniejszenie frakcjonowanego tłuszczu, podczas gdy myszy traktowane Ro-31-8220 wykazywały normalne frakcyjne skrócenie (Figura 3C), co wskazuje, że Ro-31 -8220 zapobiegał nieprawidłowościom skurczu mięśnia sercowego. Ro-31-8220 zapobiegał błędnej regulacji zdarzeń splicingu regulowanych przez CUGBP1, ale nie w MBNL1. Główną cechą molekularną DM1 jest błędna regulacja podzbioru alternatywnych zdarzeń splicingowych, co powoduje niewłaściwą ekspresję zarodkowych wzorów splicingu w tkankach dorosłych (6). Podstawą tych przejść jest zysk funkcji CUGBP1 i utrata funkcji MBNL1 (1). Stwierdzono, że kilka pierwszych zdarzeń splicingu charakteryzujących się hodowlanymi komórkami jest regulowanych antagonistycznie przez CUGBP1 i MBNL1 (28); jednak ostatnio wykazano, że oprócz regulacji tych samych zdarzeń splicingu, CUGBP1 i MBNL1 regulują alternatywne składanie osobnych celów pre-mRNA (29, 30). Zidentyfikowaliśmy alternatywne zdarzenia splicingu, które są regulowane podczas rozwoju serca myszy, które reagowały tylko na transgeniczną nadekspresję ludzkiego CUGBP1 lub wyczerpanie endogennego MBNL1 (30). W przypadku wszystkich tych zdarzeń składania, nadekspresja CUGBP1 lub zubożenie MBNL1 powodowało powrót do zarodkowego wzoru splicingu. Myszy wykazujące ekspresję EpA960 (R) RNA wykazywały błędną regulację wielu alternatywnych zdarzeń składania, w tym tych regulowanych specyficznie przez CUGBP1 lub przez MBNL1 (odnośnik 21 i dane nie pokazane). Aby ustalić, czy hamowanie PKC wpłynęło na nieprawidłową regulację splicingu docelowych pre-mRNA regulowanych przez CUGBP1 i / lub MBNL1, zbadaliśmy 3 alternatywne zdarzenia splicingowe regulowane przez CUGBP1 (ekson Ex2 21, ekson 16 Mtmr3 i ekson 6 Sorbs1) i 3 regulowane MBNL1 zdarzenia związane z łączeniem (ekson Tnnt2, ekson 5 Mbnl1 i ekson 23 Sorbs1). Myszy eksprymujące EpA960 (R) RNA potraktowane solą fizjologiczną wykazywały wzór splicingu zarodkowego w porównaniu z myszami kontrolnymi MCM dla wszystkich 6 zdarzeń splicingowych (Figura 4, A i B), który jest zgodny z oczekiwanym fenotypem podobnym do DM1. U myszy zaindukowanych w celu ekspresji EpA960. RNA i traktowanych Ro-31-8220, 2 z 3 zdarzeń związanych z regulacją spinu CUGBP1 (ekson Ex2 Ank1 i ekson 16 Mtmr3) zostały odwrócone do normalnych (Figura 4A), podczas gdy trzecia zdarzenie nie osiągnęło istotności statystycznej (ekson 6, rysunek 4A). Należy zauważyć, że na to wydarzenie wpłynęło nieznaczne obniżenie MBNL1 (30). W przeciwieństwie do celów regulowanych przez CUGBP1, wszystkie 3 splicingowe zdarzenia regulowane przez MBNL1 pozostawały nieregulowane u myszy leczonych Ro-31-8220 (P <0,05 versus MCM, Figura 4B). Warto zauważyć, że regulacja w górę CUGBP1 ma mały, ale stały wpływ na splicing eksonu 23 Sorbs1 (30). Podobny wynik uzyskano przy użyciu drugiego inhibitora PKC, Ro-32-0432 (patrz poniżej). Doszliśmy do wniosku, że Ro-31-8220 nie zapobiega zmianie zdarzeń splicingu regulowanych przez MBNL1, ale w znacznym stopniu łagodzi nieprawidłowości w łączeniu za pośrednictwem CUGBP1, zapobiegając hiperfosforylacji CUGBP1 i stabilizacji białka. Błędna regulacja zdarzeń splicingu regulowanych przez MBNL była zgodna z wynikami wskazującymi, że Ro-31-8220 nie wpływa na ekspresję EpA960 (R) RNA (Figura 1B). Figura 4 Hamowanie PKC wpływa na pośredniczone przez CUGBP1 nieregulowane alternatywne zdarzenia składania RNA więcej niż zdarzenia z udziałem MBNL1 u indukowanych myszy EpA960 / MCM. [przypisy: masaż leczniczy kręgosłupa, ankos zapasy warszawa, zapytaj trenera ] [więcej w: ciasto marchewkowe wegańskie, powiększone węzły chłonne w jamie brzusznej, goździki właściwości lecznicze ]