Hamowanie PKC łagodzi fenotyp serca w mysim modelu dystrofii miotonicznej typu 1 cd

Stwierdziliśmy, że myszy, które otrzymały Ro-31-8220, zachowały wyższy stosunek HW / BW, co sugeruje, że szlak PKC może nie być zaangażowany w ten składnik fenotypu. Ogólnie, wyniki te wskazują, że Ro-31-8220 znacząco zmniejszył śmiertelność spowodowaną przez rozszerzone CUG RNA, bez wpływu na poziom ekspresji. Ro-31-8220 zapobiega aktywacji PKC i zmniejsza hiperfosforylację CUGBP1 i regulację w górę. Aby określić, czy Ro-31-8220 hamuje aktywację PKC (3 / P II, zastosowaliśmy przeciwciało fosfo-specyficzne (Thr638 / 641) w celu określenia poziomu aktywowanych izoform PKCa / p II w porównaniu z całkowitym PKC3. W nieobecności Ro-31-8220, PKCa / P II aktywowano w tkankach serca od myszy eksprymujących EpA960. RNA w porównaniu z myszami kontrolnymi MCM (Figura 2A, ścieżki 5 i 6), jak opisano wcześniej (17). Podawanie Ro-31-8220 skutecznie zapobiegało aktywacji PKC (3 (3, a także zapobiegało zwiększeniu aktywności CUGBP1 w tkankach serca od 3 z 5 badanych zwierząt (Figura 2A, ścieżki 8. 10). Fosforylację CUGBP1 analizuje się na dwuwymiarowych żelach (2D), a następnie metodą Western blotting CUGBP1, jak opisano poprzednio (17), ponieważ modyfikacje nie zmieniają mobilności białka na żelach 1D. Analiza fosforylacji CUGBP1 za pomocą 2D / Western blot wykazała, że hiperfosforylacja była zmniejszona u większości myszy, które były indukowane przez tamoksyfen i traktowane inhibitorem PKC (TAM-Ro-31-8220, Figura 2B). Figura 2 Wpływ podawania Ro-31-8220 na aktywację PKC i ekspresję CUGBP1 i koneksyny 43. (A) Western błot CUGBP1 (50 kDa), fosfo-PKCa / P II (75 kDa), całkowite PKC (75 kDa) i koneksyna 43 (CX43; 43 kDa) u myszy MCM i myszy indukowanych do ekspresji EpA960 ( R) RNA i potraktowano solą fizjologiczną (TAM) lub Ro-31-8220 (TAM-Ro-31-8220). Ro-31-8220 podano 2 godziny po pierwszym zastrzyku tamoksyfenu. CUGBP1, PKCa / yl i connexin 43 wykryto przy oczekiwanych masach cząsteczkowych. Gwiazdka oznacza pasmo krzyżowo-reaktywne. Próbki były prowadzone na tym samym żelu. (B) Analiza 2D / Western blot CUGBP1 w tkance serca z grup MCM, TAM i TAM-Ro-31-8220. CUGBP1 przechodzi od podstawowego do kwaśnego pI po fosforylacji (17). Podawane są indywidualne liczby zwierząt, reprezentujące numer uszu każdej myszy. Connexin 43 jest głównym białkiem w złączu szczelinowym w sercu, które reguluje sprzężenie elektryczne (24). Stwierdziliśmy, że ekspresja koneksyny 43 była istotnie zmniejszona w tkance serca od zwierząt eksprymujących ekspandowany CUG RNA (Figura 2A, ścieżki 5 i 6), zgodna z wynikami z niezależnie wygenerowanego modelu mysiego dla DM1 (25). Chociaż nie jest jasne, czy utrata koneksyny 43 jest bezpośrednio odpowiedzialna za arytmie obserwowane w tym modelu DM1, zmniejszona ekspresja koneksyny 43 koreluje z zaburzeniami rytmu w modelach myszy z utraconą funkcją koneksyny 43 (26), a także innymi genetycznymi i nieenenetycznymi modelami kardiomiopatia (27). Co interesujące, poziomy białka koneksyny 43 zostały częściowo przywrócone u myszy, którym podano Ro-31-8220 (Figura 2, ścieżki 7a 11) w porównaniu z myszami eksprymującymi EpA960. R (Fig. 2A, ścieżki 5 i 6). Łącznie, wyniki sugerują, że myszy eksprymujące EpA960 (R) RNA traktowane Ro-31-8220 wykazywały niską aktywację pC / P II, obniżone hiperfosforylowanie CUGBP1, obniżone poziomy białka CUGBP1 i częściowo zachowane poziomy białka koneksyny 43. Wyniki te potwierdzają centralną rolę PKC w patogenezie DM1. Podawanie Ro-31-8220 zapobiega elektrofizjologii serca i dysfunkcjom skurczowym. Myszy eksprymujące EpA960 (R) RNA w sercu wykazywały rozszerzoną kardiomiopatię, dysfunkcję skurczową i rozkurczową oraz zaburzenia przewodzenia, w tym wydłużone odstępy PR i poszerzenie zespołu QRS (21). Aby określić, który aspekt fenotypu serca został poprawiony przez Ro-31-8220, najpierw sprawdziliśmy jego wpływ na przewodzenie serca za pomocą telemetrii EKG. Podawanie Ro-31-8220 nie miało wpływu na częstość akcji serca, odstęp PR, odstęp QTc lub czas trwania zespołu QRS u myszy przed indukcją EpA960 (R) RNA przez podawanie tamoksyfenu (Figura 3A i Tabela 1), wskazując, że Ro-31-8220 sam nie wpływał na elektrofizjologię serca. Po indukcji ekspresji EpA960 (R) RNA wszystkie myszy, które otrzymały pozorowane injekcje soli fizjologicznej wykazywały wydłużone odstępy PR (figura 3A i tabela 1), a zwierzę opracowało blok serca trzeciego stopnia (figura 3B). Jednakże myszy leczone Ro-31-8220 wykazywały znacznie zmniejszone wydłużenie odstępu PR (figura 3A i tabela 1). Myszy traktowane pozornie wykazywały również rozszerzanie się zespołu QRS, jak opisano wcześniej (21), ale różnice nie osiągnęły istotności statystycznej (tabela 1)
[więcej w: koszt rezonansu magnetycznego, powiększone węzły chłonne w jamie brzusznej, mma core ]
[patrz też: masaż leczniczy kręgosłupa, koszt rezonansu magnetycznego, dieta przyspieszająca metabolizm jadłospis ]