Hamowanie PKC łagodzi fenotyp serca w mysim modelu dystrofii miotonicznej typu 1 ad 7

Wcześniej wykazaliśmy, że szlak sygnalizacji PKC jest aktywowany przez ekspresję RNA zawierającego powtórzenie CUG w hodowli komórkowej, modelu myszy DM1 oraz w tkankach serca DM1 (17). Pokazaliśmy również, że aktywacja PKC jest wczesnym zdarzeniem, wykrywalnym 6 godzin po indukcji EpA960. RNA w specyficznym dla serca modelu myszy DM1 (17). W tym badaniu dostarczamy pierwszego dowodu na naszą wiedzę, że aktywacja PKC odgrywa patogenną rolę w patogenezie sercowej DM1 i że wczesna blokada aktywności PKC zmniejsza śmiertelność, arytmie i zmniejsza pojemność minutową serca. Stwierdziliśmy, że hamowanie PKC tłumiło hiperfosforylację i regulację w górę CUGBP1, jak również nieregulowane splicing specyficznych dla CUGBP1 celów. Przeciwnie, na inhibitory PKC nie wpływają ani splicingowe zdarzenia regulowane przez MBNL1, ani jego posttranslacyjne modyfikacje. Zatem, blokowanie aktywności PKC może zapewnić narzędzie do rozróżniania różnych wkładów CUGBP1 i MBNL1 w fenotyp serca DM1. Rola aktywacji PKC jest związana z patogenezą przerostu serca, niewydolności serca i choroby niedokrwiennej serca (32. 35). Genetyczne lub farmakologiczne hamowanie aktywacji PKC poprawia kurczliwość serca w kilku modelach niewydolności serca (23, 36, 37). Korzystny wpływ hamowania PKC w mysim modelu DM1 wydaje się nie wynikać z ogólnego zwiększenia kurczliwości, ale raczej silnie koreluje ze zmniejszoną aktywacją PKC, hiperfosforylacją i stanami ustalonymi CUGBP1. Mechanizm, dzięki któremu Ro-31-8220 zapobiega nieprawidłowościom serca, jest prawdopodobnie zależny od wpływu na wiele dalszych celów PKC. Chociaż pozostaje jeszcze ustalenie bezpośredniego związku przyczynowo-skutkowego pomiędzy zmniejszoną ekspresją CUGBP1 i poprawioną funkcją serca, wykazaliśmy, że hamowanie PKC nie zmniejsza śmiertelności myszy nadeksprymujących CUGBP1 przez mechanizm niezależny od PKC (Figura 6), co potwierdza tezę, że ochronny odpowiedź na inhibitory PKC jest związana ze zmniejszoną ekspresją CUGBP1. Ogólnie istnieje silna korelacja między hamowaniem aktywacji PKC, hiperfosforylacją CUGBP1 i stabilizacją, a normalizowanym łączeniem celów CUGBP1 i poprawą funkcji serca. Wykazano, że dwa różne inhibitory PKC mają działanie ochronne. Oba zapobiegały śmiertelności i zmniejszały hiperfosforylację CUGBP1, ale różniły się zdolnością do zapobiegania nieprawidłowościom przewodzenia u myszy eksprymujących EpA960. RNA. Ta różnica prawdopodobnie będzie związana z różnicami w profilach izoform PKC hamowanych przez Ro-31-8220 i Ro-32-0432 oraz różnice w okresie półtrwania tych leków u myszy. Na przykład Ro-31-8220 jest silniejszym inhibitorem PKC. i. II niż Ro-32-0432 (31). Okazało się również, że Ro-31-8220 był bardziej skuteczny w zmniejszaniu poziomu hiperfosforylacji CUGBP1 i poziomu białka w stanie ustalonym. Nieoczekiwana obserwacja była taka, że myszy mogły przetrwać przez 22 dni po wycofaniu podawania Ro-31-8220 pomimo aktywowanego PKCa / yl, podwyższonego CUGBP1 i nieprawidłowej regulacji docelowych pre-mRNA regulowanych przez CUGBP1. Jedną z możliwości jest to, że hamowanie PKC. Chroni. myszy z ostrych skutków indukowanego EpA960. RNA. DM1 jest przewlekłą i postępującą chorobą i możliwe jest, że zwierzęta te rozwiną przewlekły fenotyp serca DM1 w dłuższym okresie czasu po zatrzymaniu podawania Ro-31-8220. Podsumowując, wykazaliśmy, że hamowanie aktywacji PKC poprawia kliniczny fenotyp serca DM1 indukowany przez ekspresję EpA960. RNA, wspierając bezpośrednią rolę szlaku PKC w patogenezie DM1. Patogenne skutki aktywacji PKC obejmują regulację w górę CUGBP1 i prawdopodobnie obejmują modyfikację innych dalszych celów. Metody Modele zwierzęce i podawanie Ro-31-8220. Stosowanie indukowalnego tamoksyfenowo swoistego dla mysiej modelu myszy DM1 opisano wcześniej (21). W tym badaniu wykorzystano linię EpA960, która wyraża najwyższy poziom EpA960 (R) RNA (linia 1323). Wszystkie myszy bitransgeniczne EpA960 / MCM, jak również kontrole MCM były potomstwem F1 czystych linii EpA960 i MCM. Zwierzęta MCM otrzymano od J. Molkentin (University of Cincinnati, Cincinnati, Ohio, USA). EpA960 (R) RNA indukowano u myszy bitransgenicznych EpA960 / MCM z 5 kolejnymi codziennymi dootrzewnowymi iniekcjami tamoksyfenu (20 mg / kg / dzień) (21). Inhibitor PKC Ro-31-8220 (6 mg na kg masy ciała) i Ro-32-0432 (6 mg na kg masy ciała) dostarczono dootrzewnowo w roztworze soli, jak opisano (23). Myszom myszy leczonym wstrzyknięto sam roztwór soli
[podobne: kimura chwyt, zapytaj trenera, centermed słoneczna tarnów ]
[więcej w: czarna porzeczka odmiany, zapytaj trenera, mma core ]