Connexin 43 działa jako cytoochronny mediator transdukcji sygnału przez stymulowanie mitochondrialnych kanałów KATP w kardiomiocytach myszy czesc 4

Biorąc pod uwagę, że sarcolemmal Cx43 jest celem PKC. (23) i PKC. jest konstytutywnie umiejscowiony w mitochondriach (24), uzasadniliśmy, że kanały mitoKATP mogą być aktywowane przez mitochondrialne PKC. i że efekt ten może być mediowany przez mitochondrialny Cx43. Zatem analizowaliśmy wpływ aktywacji PKC przez PMA (2. M) i selektywny PKC. agonista peptydowy. receptor aktywowanej kinazy C ( RACK) (0,5. M) na jednokanałowych mitoKATP w dzikim typie i Cx43 + /. myszy. Aktywator PKC PMA, ale nie jego nieaktywny analog 4a-PMA (2. M) znacznie zwiększył aktywność kanału mitoKATP (Figura 5, A i B oraz Tabela 4). Podobnie selektywna stymulacja PKC. przez. RACK zwiększone prawdopodobieństwo otwarcia kanału mitoKATP, średni czas otwarcia i dostępność (Figura 5, D i E, i Tabela 4), podczas gdy zarówno PMA, jak i RACK spowodowały znacznie zmniejszoną aktywację kanałów mitoKATP w Cx43 + /. w porównaniu z myszami typu dzikiego (Figura 5, A, B, D i E oraz Tabela 4). Ponadto, analiza Western blot wykazała zwiększoną fosforylację Cx43 w miejscu fosforylacji PKC Ser368 w mitochondriach stymulowanych przez RACK (5. M) względem kontroli (Figura 4, F. H), zgodnie z poglądem, że fosforylacja Cx43 przez PKC. służy do ułatwienia transdukcji sygnału cytoochronnego do kanałów mitoKATP. W celu dalszego wspierania interakcji mitochondrialnego Cx43 i PKCa, próbowaliśmy ustalić, czy te dwa białka mogą się łączyć w mitochondrialnych kompleksach białkowych. Immunoprecypitacja Cx43 z izolowanych mitochondriów ujawniła sygnał dla PKCa, podczas gdy immunoprecypitacja PKC. również pokazał sygnał dla Cx43 (Figura 5C), wskazując na bliskie połączenie dwóch białek. Zastosowanie anty-króliczych IgG do immunoprecypitacji nie wykazało współstrącania jednego z analizowanych białek, z wyłączeniem efektów niespecyficznych. Figura 5 Pobudzanie przez PKC aktywności kanału mitoKATP jest zmniejszone w Cx43 + /. myszy. (A) Aktywność jednokanałowa MitoKATP jest aktywowana przez stymulację PKC za pomocą PMA2. M (u góry po lewej), która może być hamowana przez glibenklamid 10. M (u góry po prawej). Indukowana przez PMA aktywacja kanału mitoKATP jest zmniejszona w Cx43 + /. myszy (na dole). Napięcia są wskazane. (B) Średnie wartości prawdopodobieństwa otwarcia kanału mitoKATP (Po, całkowity, lewy) i średni czas otwarty (prawy) w kontroli (czarny) i Cx43 + /. myszy (białe) pod nieobecność i obecność PMA i glibenklamidu, jak wskazano; n wartości podano w nawiasach. * P <0,05 względem kontroli; §P <0,05 versus Cx43 + / .; P <0,05 względem kontroli + PMA. (C) Białka mitochondriów były immunoprecypitowane (IMP) dla Cx43 (u góry) lub PKC. (Dolny). Analiza Western blot dla współstrąconego Cx43 i PKC. ujawnił pozytywne wyniki. Jako kontrolę ujemną stosowano strącanie białek mitochondrialnych za pomocą przeciwciał anty-króliczych IgG. Wejściowe lizaty i całkowity ekstrakt białek komorowych (TP) analizowano jako kontrolę pozytywną. Przeprowadzono immunoblotting przeciwko VDAC, aby wykluczyć jakiekolwiek niespecyficzne koimmunoprecypitację. (D) Aktywność jednokanałowa MitoKATP była aktywowana przez selektywną PKC. stymulacja za pomocą RACK (u góry po lewej), która może być hamowana przez MgATP (u góry po prawej). Aktywacja kanału mitoKATP indukowanego RACK była zmniejszona w Cx43 + / p. myszy (na dole). (E) Średnie wartości prawdopodobieństwa otwarcia kanału mitoKATP w kontroli (Po, całkowita, czarna) i Cx43 + /. myszy (białe) pod nieobecność i obecność selektywnego PKC. agonista peptydu. RACK (0,5. M) i MgATP (100. M), jak wskazano; n wartości podano w nawiasach [patrz też: łojotokowe zapalenie skóry głowy wypadanie włosów, ciasto z truskawkami moje wypieki, nr na pogotowie ratunkowe ] [patrz też: ciasto z truskawkami moje wypieki, czarna porzeczka odmiany, zapytaj trenera ]