Connexin 43 działa jako cytoochronny mediator transdukcji sygnału przez stymulowanie mitochondrialnych kanałów KATP w kardiomiocytach myszy ad 6

Podczas gdy takie kanały mogą przewodzić potas i mogą być modulowane przez ATP (30), obecność kanałów mitoKATP w mitochondriach międzyfibrylowych bez Cx43 argumentuje przeciwko poglądowi, że Cx43 tworzy porowatość przewodzenia kanałów mitoKATP. Istnienie pory kanału, która jest odmienna od Cx43, jest dodatkowo wspierane przez niższą jednokanałową przewodność kanałów mitoKATP niż podano dla stanów pełnego i subprzewodnictwa koneksonów i połączeń luki (31). Przeciwnie, nasze wyniki pokazują, że Cx43 jest niezbędna do transdukcji sygnału cytoochronnego na kanałach mitoKATP, który jest 7-krotnie wspomagany, tj. Przez zmniejszoną reaktywność tych kanałów w obecności (a) farmakologicznego hamowania Cx43, (b) peptydów mimetycznych Cx43, (c) genetyczna heterozygotyczna supresja Cx43, (d) prawie całkowita redukcja Cx43 w warunkowych genetycznych myszach z knockdown Cx43, (e) addytywne działanie 43GAP27 z genetycznym Cx43 + /. supresja, (f) uratowanie wrażliwości na diazoksyd w Cx43 + /. myszy po wzroście Cx43 indukowanym przez IP i (g) braku odpowiedzi diazoksyd / PKC w mitochondriach międzyfibrylarnych bez Cx43. Badania in vivo i jednokomórkowe wykazały, że zarówno Cx43, jak i PKC. przemieszczają się do mitochondriów podczas IP i są kluczowymi komponentami wstępnego kondycjonowania (7, 10, 22). Podczas gdy obecne eksperymenty potwierdzają wzrost mitochondrialnego Cx43 za pośrednictwem IP, nasze wyniki dodatkowo zapewniają ponadto funkcjonalne połączenie pomiędzy tymi dwoma białkami, z PKC. fosforylację mitochondrialnego Cx43 in vitro i znajdowanie się powyżej Cx43 w kaskadach sygnałowych cytoprotekcyjnych. Chociaż nasze eksperymenty mogą nie rozróżniać, czy IP i PKC. wywoływać stymulację kanałów mitoKATP poprzez regulację w górę samego mitochondrialnego Cx43 lub dodatkową fosforylację Cx43 in vivo, nasza obserwacja regulacji kanału mitoKATP za pośrednictwem Cx43 wystarcza do wyjaśnienia wcześniejszych doniesień o znoszonym farmakologicznym i IP i zmniejszeniu tworzenia się ROS w Cx43 + /. myszy (9. 11). Pojawiające się dane wskazują, że lokalizacja cząsteczek sygnałowych jest kluczowym składnikiem funkcji komórki (32, 33). Wiadomo, że mitochondria są rozprowadzane w różnych przedziałach subkomórkowych (25). Nasze dane pokazują, że reakcja na cytoprotekcyjne przekazywanie sygnału przez PKC, a następnie kanały mitoKATP jest ograniczona do subkolemermalnych mitochondriów, które są zlokalizowane w sąsiedztwie receptorów znajdujących się powyżej. I odwrotnie, wydaje się, że mitochondria między włókniste nie biorą udziału w tych szlakach chroniących komórki, biorąc pod uwagę obserwowany diazoksyd i niewrażliwość PKC ich kanałów mitoKATP. W związku z tym nasze obserwacje rozszerzają wcześniejsze doniesienia o wyraźnej strukturze i właściwościach biochemicznych podgrup mitochondrialnych (25, 34), wskazując teraz, że te subpopulacje są przypisane do różnych funkcji komórkowych i sugerują, że kardiologiczne zabezpieczenie cytoprotekcyjne poprzez aktywację kanału mitoKATP jest ograniczone do ograniczonego przedziału podkoronowego. Zrozumienie mechanizmów związanych z ochroną komórek zwiększa oczekiwanie, że można interferować farmakologicznie, aby zablokować lub modulować śmierć komórki. Fakt, że Cx43 reguluje aktywność kanałów mitoKATP w natywnych mitochondriach, czyni Cx43 atrakcyjnym celem dla rozwoju leków przeciw uszkodzeniom niedokrwiennym. Metody Obecne badanie zostało przeprowadzone za zgodą Komitetu Bioetycznego Landesamt für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz Nordrhein-Westfalen w Recklinghausen i jest zgodne z przewodnikiem NIH dla opieki i wykorzystania zwierząt laboratoryjnych (publikacja nr 85-23. ). Serca myszy. Serca uzyskano od myszy C57BL / 6J, heterozygotycznego Cx43 + / A. myszy (35) i myszy z miotu typu dzikiego, jak wskazano. Bardziej kompletną ablację Cx43 indukowano u dorosłych myszy Cx43Cre-ER (T) / fl przez wstrzyknięcie dootrzewnowe 3 mg 4-OHT raz dziennie przez 5 kolejnych dni, jak opisano wcześniej (10, 21). Te zwierzęta uśmiercono w dniu 12 po pierwszym wstrzyknięciu. Do kontroli użyto myszy Cx43fl / fl (10, 21). Wytwarzanie kardiomiocytów i mitochlastów podsystemowych / międzyfibrylowych. Miocyty pojedynczej komory izolowano przez trawienie enzymatyczne, jak opisano wcześniej (36). Świeżo wyizolowane kardiomiocyty stosowano w ciągu 1-2 godzin. Myocyty znakowano Mitotracker Green (1 (M, Molecular Probes, Invitrogen), aby ułatwić identyfikację nietkniętych mitoplastów po dalszym oczyszczaniu subkomórkowym. Izolowane nienaruszone subsarcolemmal mitoplasty zostały przygotowane z izolowanych miocytów poprzez wirowanie różnicowe, jak wcześniej podano (13, 37. 39). W skrócie, miocyty zawieszono w ciągu 30 minut w roztworze zawierającym (w mM) 250 sacharozy, 5 K-HEPES i CaCl2 w celu rozerwania sarkolemmy i wirowano przy 1500 g przez 10 minut.
[patrz też: ciasto marchewkowe wegańskie, ciasto z truskawkami moje wypieki, masaż leczniczy kręgosłupa ]
[więcej w: trening pod sztuki walki, techniki mma, kimura chwyt ]