Connexin 43 działa jako cytoochronny mediator transdukcji sygnału przez stymulowanie mitochondrialnych kanałów KATP w kardiomiocytach myszy ad 5

Wpływ stymulacji PKC przez PMA (2 MM) i peptyd selektywny epsilon R RACK (0,5 M M) na zachowanie jednokanałowe mitoKATP u dzikiego typu w porównaniu z Cx43 + / p Myszy W kardiomiocytach istnieją dwie populacje mitochondriów, tj. subkolemiczne mitochondria zlokalizowane pod błoną plazmatyczną i mitochondriami międzybibliowymi znajdowanymi między miofibrylarami (25). Ostatnio okazało się, że mitochondria międzybiblioteczne nie zawierają wykrywalnego Cx43 (12). Biorąc pod uwagę nasze obserwacje, że Cx43 przekazuje sygnały cytoochronne do kanałów mitoKATP, uzasadniliśmy zatem, że stymulacja kanałowa mitoKATP za pośrednictwem leków i PKC może być ograniczona do subkolemermalnych mitochondriów. W ten sposób oceniliśmy charakterystykę kanału i reaktywność mitoKATP w izolowanych międzywęzłowych mitochondriach myszy typu dzikiego. Prądy MitoKATP można było rejestrować w mitoplastach międzyfibrylowych o właściwościach jednokanałowych podobnych do właściwości pod-bichromermalnych mitochondriów (Figura 6, AEE). Jednokanałowa aktywność mitoKATP w międzywęzłowych mitoplastach była całkowicie niewrażliwa na aktywację PKC zarówno przez PMA, jak i diazoksyd (Figura 6, A, B i D). Co ważne, wyjściowa aktywność była hamowana przez MgATP i glibenklamid, co potwierdza tożsamość kanału mitoKATP (Figura 6, A, B i D). Brak reaktywności kanału mitoKATP na PKC i stymulacja diazoksydem w mitochondriach międzyfibrylowych dodatkowo potwierdził fundamentalną rolę Cx43 dla aktywacji kanału mitoKATP i wskazuje funkcjonalny podział mitochondriów w sygnalizacji komórkowej. Figura 6 Aktywność kanału MitoKATP międzyfibrylarnych mitochondriów jest niewrażliwa na stymulację PKC i diazoksydu (100 .M). (A) Prąd jednokanałowy MitoKATP (przy ~ 60 mV) międzyfibrylarnych mitochondriów (po lewej), który nie był aktywowany przez diazoksyd (w środku), ale był hamowany przez glibenklamid (po prawej). (B) Średnie wartości prawdopodobieństwa otwarcia kanału mitoKATP (Po, całkowite, u góry po lewej), Ipeak (u góry po prawej), średni czas otwarty (u dołu po lewej) i średni czas zamknięcia (u dołu, z prawej) międzyfibrylarnych mitochondriów w nieobecności i obecności diazoksydu, PMA, glibenklamidu i MgATP, jak wskazano; n wartości podano w nawiasach. * P <0,05 względem kontroli. Amplituda jednokanałowa jako funkcja potencjałów testowych. (C) Przewodność skarpowa (14,1 . 0,5 pS, n = 6) międzyfibrylarnych kanałów mitoKATP, określona metodą regresji liniowej w poszczególnych doświadczeniach, była podobna do podskładnikowej mitochondriów (ryc. 3B). (D) MonoKATP jednokanałowa aktywność międzyfibrylarnych mitochondriów (IFM) nie była aktywowana przez stymulację PKC 2. M PMA (góra). Wyjściowa aktywność została zahamowana przez 100 .M MgATP (na dole). Napięcia są wskazane. (E) Histogram amplitudy międzyfibrylarnego prądu mitoKATP w warunkach wyjściowych ujawnił średnią wartość równą. 0,85. 0,04 pA (n = 12). Omówienie Ochrona komórek obejmuje aktywację sygnalizacji endogennej, która może nadawać znaczącą oporność na utleniacz i inne stresy związane z niedotlenieniem / ponownym utlenieniem, tym samym promując zwiększoną zdolność do przeżycia komórek (1. 3). Chociaż przekonująco udowodniono, że kanały mitoKATP służą jako centralne efektory różnych szlaków przekazywania sygnałów cytoochronnych, rzeczywiste białka mitochondrialne zaangażowane w ten proces są nieznane (1, 5, 6, 8). Nasze wyniki dostarczają pierwszych dowodów funkcjonalnych na naszą wiedzę o kompleksie kanałów mitoKATP w natywnych mitochondriach, łącząc Cx43 z otwarciem kanału mitoKATP. Podczas oczyszczania białek mitochondrialnych i późniejszej rekonstytucji w sztucznych dwuwarstwach lipidowych lub proteosomach sugerowano, że kanały mitoKATP są włączone do kompleksu wielobiałkowego (26, 27), proces ten może być zagrożony przez niespecyficzne zanieczyszczenie, a związek białka niekoniecznie odzwierciedla funkcjonalne interakcje w natywnym papierowa chusteczka. Co więcej, specyfikacja oczyszczonych białek była w dużej mierze oparta na immunoreaktywności bez szczegółowej analizy proteomicznej, która niesie pewność fałszywie dodatniego wiązania krzyżowego przeciwciała z niespokrewnionymi białkami (8,27). W niniejszym badaniu staraliśmy się ominąć te ograniczenia i wykazać w izolowanych mitoplastach farmakologiczny, mimetyk peptydowy i podejście genetyczne, że Cx43 odgrywa kluczową rolę w stymulacji kanału mitoKATP indukowanej przez diazoksyd i PKC, definiując w ten sposób to, w co wierzymy być nowatorską rolą funkcjonalną dla Cx43. Poza sprzężeniem z komórkami, heksamery koneksyny, monomery i fragmenty końcowe C są zaangażowane w sygnalizację komórkową (28, 29). Nasza obserwacja, że karbenoksolon, który hamuje połączenia szczelinowe i heksamery koneksyny (19), tłumił aktywację kanału mitoKATP podobnie jak niedobór genetyczny Cx43 sugeruje, że Cx43 w mitochondriach tworzy hemakanały [podobne: powiększone węzły chłonne w jamie brzusznej, nr na pogotowie ratunkowe, goździki właściwości lecznicze ] [podobne: mma core, mmacore, ankos zapasy warszawa ]