Chimeryzm mieszany i tolerancja bez napromieniowania całego ciała w dużym modelu zwierzęcym cd

Kontrolne barwienia przeprowadzono przez podstawienie pierwszorzędowego przeciwciała nieistotnym mysim mAb. Przeszczepy skóry. Przeszczepy skóry wykonano za pomocą wcześniej opublikowanych technik (28). W skrócie, skórkę o podzielonej grubości zebrano od dawcy i umieszczono na głębokim łóżku o grubości dzielonej na klatce piersiowej biorcy. Przeszczepy badano codziennie aż do momentu odrzucenia. Odrzucenie określono makroskopowo i zdefiniowano jako rozlaną sinicę i stwardnienie przeszczepu. Przeszczep nerki. Procedury chirurgiczne stosowane do przeszczepu nerki zostały szczegółowo opisane wcześniej (29, 30). Półpustynny, trwały cewnik żyły środkowej Hickmana został umieszczony chirurgicznie w zewnętrznej żyle szyjnej. Cewnik ułatwiał podawanie CyA i częste pobieranie krwi w celu monitorowania czynności nerek oraz testy in vitro. Odrzucenie monitorowano za pomocą testów kreatyniny w osoczu i badania histologicznego tkanki biopsyjnej. Przygotowanie PBMC. W celu oddzielenia PBMC świeżo heparynizowaną pełną krew rozcieńczono 1: 2 HBSS (GIBCO BRL, Gaithersburg, Maryland, USA), a komórki jednojądrzaste otrzymano przez wirowanie w gradiencie z użyciem pożywki do rozdzielania limfocytów (Organon Teknika, Durham, North Carolina, USA) . Jednojądrzaste komórki przemyto raz HBSS, a zanieczyszczające krwinki zostały zlizowane buforem potasowym chlorku amonu (B & B Research Laboratory, Fiskeville, Rhode Island, USA). Komórki następnie przemyto HBSS i ponownie zawieszono w pożywce do hodowli tkankowej. Wszystkie zawiesiny komórek trzymano w temperaturze 4 ° C aż do użycia w testach komórkowych. Limfoliza komórkowa. Pożywki do hodowli komórkowych z limfolizacją komórkową (CML) składały się z RPMI 1640 (GIBCO BRL) uzupełnionego 6% FCS (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri, USA), 100 U / ml penicyliny, 135 ug / ml streptomycyny (GIBCO BRL), 50 .g / ml gentamycyny (GIBCO BRL), 10 mM HEPES (Fisher Scientific, Pittsburgh, Pensylwania, USA), 2 mM L-glutaminy (GIBCO BRL), mM pirogronianu sodu (BioWhittaker Inc., Walkersville Maryland, USA) i 5 x 10-5 M-2-merkaptoetanolu (Sigma Chemical Co.). Pożywki stosowane do fazy efektorowej testów CML składały się z Basal Medium Eagle (GIBCO BRL) uzupełnionego 6% surowicą zastępującą surowicę (Sigma Chemical Co.). Testy CML przeprowadzono jak opisano wcześniej (29, 30). W skrócie, hodowle limfocytów zawierające 4 x 106 odpowiadającego i 4 x 106 napromieniowanych (25 Gy) stymulujących PBMC w 2 ml pożywki inkubowano przez 6 dni w 37 ° C w 7% CO2 i 100% wilgotności. Zebrano zbiorcze kultury i komórki efektorowe badano na blastach PHA znakowanych 51Cr. Testy przeprowadzono w seryjnie rozcieńczonych stosunkach efektor / docelowy (100: 1, 50: 1, 25: 1, 12: 1). Po 5,5 godzinach inkubacji komórek efektorowych z celami 5 x 103, supernatanty zebrano i określono uwalnianie 51Cr na liczniku gamma. Poziomy wyjściowe mierzono jako szybkość spontanicznego uwalniania 51Cr z 5 × 103 celów. Wyniki wyrażono jako lizę specyficzną względem procentu:% lizy specyficznej = uwalnianie eksperymentalne (cpm). spontaniczne wydanie (cpm) / maksymalne uwolnienie (cpm). uwalnianie spontaniczne (cpm)] × 100. Wyniki Schemat kondycjonowania. Zwierzęta były kondycjonowane nietoksycznym protokołem, składającym się z limfocytów TI i in vivo, przed infuzją komórek dawcy. W trakcie tych eksperymentów zwiększono dawkę PBSC w dawkach TI i dawcy, aby uzyskać spójne wszczepienie przez pełne bariery niedopasowania. Figura jest schematem schematu preparatywnego do przeszczepiania komórek krwiotwórczych, który był stosowany we wszystkich później przeszczepionych zwierzętach. Podsumowanie zwierząt otrzymujących przeszczep PBSC (PBSCT) zgodnie z tym protokołem przedstawiono w Tabeli 1. Figura Diagram schematu preparatywnego stosowanego w PBSCT. Konieczne były dodatkowe 3 dni leukaferezy, aby uzyskać 200 × 108 / kg dla zwierząt. 13101. Tabela Podsumowanie zwierząt leczonych schematem leczenia niemosiłaczkowego plus mobilizacja i zbieranie PBSCT PBSC. Niedawno wykazaliśmy, że połączenie świńskiego pSCF, pIL-3 i ludzkiego G-CSF może być użyte do zmobilizowania komórek progenitorowych komórek macierzystych do krwi obwodowej miniaturowej świni, a prekursory komórek macierzystych zmobilizowane w tych warunkach były zdolne do odtworzenia napromienione zwierzę (20). Po leczeniu cytokinami liczba białych krwinek u jednego reprezentatywnego zwierzęcia dawcy gwałtownie wzrosła do wartości szczytowej około 80 x 103 / mm3. PBSC zebrano przez leukaferezę w dniach 5. 7 i zebrano 18 x 1010 komórek jednojądrzastych. Taka procedura mobilizacji zapewnia zatem ponad 10-krotność liczby komórek uzyskanych przez pobranie szpiku kostnego z trzonów kręgowych i kości długich (31) i ponad 50-krotność liczby komórek osiągalnych przez zbiory od żywych dawców (31). Zmniejszenie limfocytów T krwi obwodowej u kondycjonowanych biorców. Ustalenie mieszanego chimeryzmu zależy od skutecznego wyczerpania limfocytów T u biorcy (22)
[przypisy: centermed słoneczna tarnów, ciasto z truskawkami moje wypieki, goździki właściwości lecznicze ]
[przypisy: mma core, mmacore, ankos zapasy warszawa ]