Chimeryzm mieszany i tolerancja bez napromieniowania całego ciała w dużym modelu zwierzęcym ad 5

Ten sam protokół (700 cGy TI, zubożenie limfocytów T i 100 lub 150 x 108 / kg PBSC dawcy) zastosowano do dwóch pojedynczych haplotypów niezgodnych od odbiorców. Jedno z tych zwierząt (nr 12885) wykazywało poziom chimeryzmu limfocytów 5. 10% w dniu 30. Jednakże, po zaprzestaniu CyA, poziom ten stopniowo spadał, i pomimo dodatkowej infuzji 20 x 108 / kg mobilizowanych PBSCs od tego samego dawcy, chimeryzmu nie można było wykryć po 50. dniu. Chimeryzm w linii mieloidalnej był ledwo wykrywalny od początku (fig. 5a). Ponadto chimeryzacja grasicza u tego zwierzęcia nigdy nie była wykrywalna, mimo że grasica wyglądała zdrowo i rosła w dniach 38 i 45, jak oceniano przez wizualizację podczas biopsji. Figura 5 Chimeryzm obwodowy u zwierząt otrzymujących PBSCT o niedopasowanym PAP. A z haplotypem o (a) 700 cGy TI; (b) 1000 cGy TI. W drugim zwierzęciu (nr 13476) od początku osiągnięto wszczepienie z wysokim poziomem chimeryzmu limfoidalnego (50. 60%). Chimeryzm mieloidalny ustabilizował się na około 25-30% w 20 dniu, ale potem spadł po 50 dniu, aby stać się prawie niewykrywalnym. Chimeryzm grymatyczny został wykryty w biopsjach wykonanych w 28 dniu (15%), wzrósł w 40 dniu (40%), ale ponownie spadł w 60 dniu (14%) i był nieobecny w dniu 98. Chimeryzm w liniach limfoidalnych utrzymywał się u tego zwierzęcia po ustąpienie CyA w dniu 30, ale wydawało się, że stopniowo zmniejsza się w dniu 300 (ryc. 5a). Nie zaobserwowano klinicznych objawów GvHD. TI (1000 cGy). Opisane tu wyniki sugerują, że schemat preparatywny był wystarczający, aby umożliwić wszczepienie PBSC z dopasowaniem MHC, ale prawdopodobnie był na progu umożliwiającym wszczepienie przez barierę MHC. Wcześniej badaliśmy przeszczepienie limfohematopoetyczne u innych gatunków, które są leczone za pomocą schematu subletalnego WBI plus TI. Zarówno u myszy (1), jak iu małp (34), stwierdziliśmy, że można uzyskać skuteczne wszczepienie w obrębie barier MHC przy użyciu 300 cGy WBI i 700 cGy TI. W tych schematach całkowite napromieniowanie grasicy wynosi 1000 cGy. Uznaliśmy, że niepowodzenie wszczepienia w zwierzęciu nie ma miejsca. 12885 mogło być spowodowane niewystarczającą całkowitą wartością TI. Dlatego poziom TI w tym. Nie WBI. reżim zwiększono do 1000 cGy dla kolejnych pojedynczych haplotypów niesparowanych przez SLA. Dwa zwierzęta (nr 13100 i 13101) leczone 1000 cGy TI, zubożenie limfocytów T, 30 dni CyA i 100 x 108 do 200 x 108 / kg PBSC dawcy wprowadziły i wytworzyły mieszany chimeryzm (Figura 5b). Nr zwierząt 13100 wykazywał 60% 70% chimeryzmu przez pierwsze 3 tygodnie, ale poziom ten zmniejszył się dramatycznie po zaprzestaniu CyA w 30. dniu. Wkrótce potem u zwierzęcia wystąpiła wysoka gorączka, wysoka liczba WBC i stała się mniej aktywna, prawdopodobnie odzwierciedlając początek. GvHD (patrz dalej). Zwierzę to odzyskało spontanicznie do dnia 36. Równolegle z odzyskiem chimeryzm limfocytów dawcy gwałtownie się zwiększył, a chimeryzm limfocytów 70-80% został osiągnięty i utrzymany od dnia 40 do chwili uśmiercenia w dniu 73. Poziom chimeryzmu w liniach szpikowych był niższy niż w linii limfocytów (10. 20%) we wszystkich okresach (Figura 5b). Chimeryzm grobowy u tego zwierzęcia osiągnął 4. 7% w dniu 35, w tym czasie zwierzę wykazywało atrofię grasicy, prawdopodobnie wywołaną przez GvHD. Nr zwierząt 13101 osiągnął 80% chimeryzację limfocytów dawców w drugim tygodniu i utrzymał ten poziom przez ponad 120 dni. Chimeryzacja dawców w linii mieloidowej zwiększyła się w drugim tygodniu, a następnie utrzymywała się na poziomie 40. 50% aż do dnia 40. W tym czasie zwierzę wykazało przemijający wzrost (80%) w chimeryzmie mieloidalnym w ciągu dnia 60, po czym poziom chimeryzmu granulocytów wzrósł a chimeryzm monocytów zmniejszył się (Figura 5b). Chimeryzm gryma- tyczny u tego zwierzęcia osiągnął także 4. 7% w dniu 35, w którym to czasie zwierzę wykazywało także atrofię grasicy. Jednak wszystkie oznaki GvHD ustąpiły do 90 dnia, a grasica zaczęła się rozwijać, osiągając normalny rozmiar i 20% chimeryzację grasicy do 158 dnia (Figura 6, a. E). Fig. 6a pokazuje, że donorowe PAA + tymocytów określone przez FACS były obecne wśród niedojrzałych tymocytów CD1-dodatnich i wśród dojrzałych tymocytów CD3. Zwierzę pozostawało mieszaną chimerą przez ponad 400 dni po PBSCT, z 60% limfocytami dawcy, 10% monocytami dawcy i 5% granulocytami dawcy. Figura 6Cimeryzacja wykrywana przez cytometrię przepływową i immunohistochemię w tkance biopsyjnej z tkanki zwierzęcej no. 13101 w dniu 158. (a) Podwójne zabarwienie grasicy według FACS. (b. e) Histologia (immunohistochemia). Histologia. Figura 6 (b / e) przedstawia immunohistochemiczne barwienie biopsji grasicy od zwierzęcia nr. 13101 w dniu 158 po transplantacji. Barwienie H & E ujawniło prawidłową strukturę grasicy z dobrze rozwiniętą korą i rdzeniem (Figura 6b)
[przypisy: masaż leczniczy kręgosłupa, najlepsza odzywka do rzes, ciasto z truskawkami moje wypieki ]
[patrz też: łojotokowe zapalenie skóry głowy wypadanie włosów, najlepsza odzywka do rzes, masaż leczniczy kręgosłupa ]