białko c-Fos jako cel przeciwsteoblastogennego działania witaminy D i synteza nowych analogów ad

Jak podano wcześniej (14), myszy z niedoborem OPG miały znacznie zmniejszoną gęstość mineralną kości (BMD) w wyniku nadmiernej resorpcji kości, a doustne podawanie (3, 25 (OH) 2D3 powodowało zależne od dawki polepszenie utraty kości przy piszczeli (Figura 1D). Małe dawki farmakologiczne l, 25 (OH) 2D3 zastosowane w obecnym badaniu (0,05 . 0,2 ug / kg) nie indukowały hiperkalcemii (dane nie pokazane). Wyniki te sugerują, że (3, 25 (OH) 2D3 działa jako inhibitor resorpcji kości in vivo przez przeciwdziałanie szlakowi RANKL / RANK. W świetle naszych poprzednich obserwacji, że ekspresja RANKL w kości nie zwiększyła się po podaniu |, 25 (OH) 2D3 in vivo (9), postawiliśmy hipotezę, że (3, 25 (OH) 2D3 hamuje resorpcję kości przez zakłócanie sygnalizacji. poprzez receptory RANK na komórkach prekursorowych osteoklastów. Figura 11a, 25 (OH) 2D3 hamuje resorpcję kości u myszy OPG KO. Myszy OPO homozygotyczne KO (y / a) traktowano doustnie wskazanymi dawkami (3, 25 (OH) 2D3 przez 6 tygodni i liczbą osteoklastów (skorygowano względem powierzchni kości; N.Oc / BS (A), powierzchnia kości pokryta przez osteoklasty (Oc.S / BS) (B), wydalanie z moczem deoksypirydynoliny (DPD, poprawione pod kątem kreatyniny [Cr]) (C) i BMD (D) na lewej kości udowej zostały określone w sposób opisany w Metodach Heterozygotycznych (+ / (a) mioty z miotu służyły jako kontrola. * P <0,01 względem grupy OPG KO z traktowaniem nośnikiem, P <0,01 względem heterozygotycznej grupy kontrolnej, n = 6 każda grupa, (3, 25 (OH) 2D3 hamuje rozwój osteoklastów przez działanie bezpośrednio na osteoklast W celu zbadania, czy 1., 25 (OH) 2D3 przeciwdziała sygnałowi osteoklastogennemu pochodzącemu z receptorów RANK, wyizolowaliśmy komórki progenitorowe osteoklastów ze szpiku kostnego myszy i zbadaliśmy wpływ 1., 25 (OH) 2D3 na Osteoklastogeneza indukowana przez RANKL W obecności M-CSF i RANKL hodowle myszy dały początek wielu wielojądrowym komórkom olbrzymim (Figura 2A), które były zdolne do tworzenia jamek resorpcyjnych na plastrze zębiny (dane nie pokazane). Traktowanie tych samych hodowli za pomocą l, 25 (OH) 2D3 spowodowało zależne od dawki zmniejszenie liczby utworzonych osteoklastów (Figura 2, A i B). (3, 25 (OH) 2D3 powodowało znaczące zmniejszenie liczby osteoklastów w stężeniu tak niskim jak 10. 9 M i hamowało tworzenie osteoklastów o 70% przy 10. 8 M (Figura 2B). Figura 21a, 25 (OH) 2D3 hamuje rozwój osteoklastów poprzez VDR, działając bezpośrednio na komórki prekursorowe osteoklastów w szpiku kostnym. (A i B) komórki prekursorowe osteoklastów izolowano ze szpiku kostnego myszy WT C57BL / 6J i VDR KO (B) jako komórki adherentne M-CSFa, jak opisano w Methods, i dalej traktowano RANKL (40 ng / ml) w nieobecności lub w obecności 10 ~ 7 Ml, A, 25 (OH) 2D3 przez 3 dni (A). Należy zauważyć, że rozwój pozytywnych wobec TRAP wielojądrzastych osteoklastów indukowanych przez RANKL był znacznie hamowany przez współtworzenie z (3, 25 (OH) 2D3. (B) Działanie hamujące | 25 (OH) 2D3 na tworzenie komórek wielojądrowych TRAP-dodatnich (MNC) było zależne od dawki i nie było widoczne w hodowlach szpiku pochodzących od myszy VDR KO, nawet przy najwyższej dawce 10. 7 M. Dane wyrażono jako procent hodowli traktowanych podłożem. * P <0,05 w porównaniu do grupy nośników, n = 6 (C) Ekspresja VDR w jelicie (linia 1) i komórki prekursorowe osteoklastów (ścieżka 2) wykryta za pomocą RT-PCR. EF-1. mRNA służyło jako kontrola dla PCR. Ścieżka 3 zawierała wodę jako kontrolę negatywną. Cały proces rozwoju osteoklastów w hodowlach mysich składa się głównie z 2 faz: po pierwsze, stadium zależnego od M-CSF wzrostu komórek progenitorowych osteoklastów, a następnie ostatniej fazy końcowego różnicowania indukowanego przez RANKL w obecności M-CSF. Ten pierwszy proces oceniano przez izolację komórek progenitorowych osteoklastów ze szpiku kostnego i pomiar ich odpowiedzi proliferacyjnych na M-CSF. Jak pokazano na Figurze 3A, traktowanie (3, 25 (OH) 2D3 pomiędzy 10. 9 M i 10. 7 M nie wpłynęło na proliferację komórek zależną od M-CSFa, co sugeruje, że ., 25 (OH) 2D3 działa głównie na ten drugi etap różnicowania. Również zgodne z tym poglądem są wyniki, że traktowanie hodowli szpiku kostnego za pomocą 1, 25 (OH) 2D3 tylko podczas drugiej połowy (3 dni) okresu 6-dniowego było wystarczające do hamowania tworzenia osteoklastów, podczas gdy jego obecność w były okres połowiczny (3 dni) podczas wzrostu zależnego od M-CSF. (Rysunek 3B) [podobne: mma core, powiększone węzły chłonne w jamie brzusznej, ciasto z truskawkami moje wypieki ] [więcej w: mmacore, ankos zapasy warszawa, trening pod sztuki walki ]