białko c-Fos jako cel przeciwsteoblastogennego działania witaminy D i synteza nowych analogów ad 7

Wpływ 2D3 na białko c-Fos w prekursorach osteoklastów kontrastuje ze zgłoszonym działaniem (1, 25 (OH) 2D3 na transkrypcję genu c-Fos w osteoblastach i innych typach komórek (37, 38). . Tak więc, mogą istnieć swoiste mechanizmy regulatorowe typu komórkowego, które modulują ekspresję ekspresji genu c-Fos w odpowiedzi na (3, 25 (OH) 2D3. Ponieważ wiele innych białek zaangażowanych w sygnalizację RANK, takich jak sam RANK, JNK, p38 MAPK, kinaza I (B, podjednostki p65 i p52 z NF-kB i c-Jun, nie ulegały wpływowi 1., 25 ( OH) 2D3, można sobie wyobrazić, że hamujący wpływ VDR jest specyficzny dla białka c-Fos w prekursorowych komórkach osteoklastów. Co ważne, supresja białka c-Fos poprzez VDR ma kluczowe znaczenie dla farmakologicznego działania witaminy D, ponieważ wykazaliśmy, że wymuszona ekspresja c-Fos blokuje hamujący wpływ witaminy D na tworzenie osteoklastów. Identyfikacja nowych syntetycznych analogów witaminy D, które były zdolne do hamowania rozwoju osteoklastów wydajniej niż naturalny hormon, (3, 25 (OH) 2D3, równolegle z większą supresją białka c-Fos, stanowi dalsze wsparcie dla naszej koncepcji, że c Aktywność supresorowa -fos jest ważna dla antyresorpcyjnej funkcji witaminy D. Ten mechanizm może również leżeć u podstaw aktywności innych ostatnio opracowanych selektywnych wobec kości analogów witaminy D (39, 40). Należy jednak zauważyć, że DD281 nie był całkowicie selektywny wobec kości i zwiększał wydalanie wapnia z moczem ponad to u myszy leczonych podłożem. W związku z tym należałoby uważnie monitorować poziomy wapnia w moczu i surowicy, jeśli ma być przetestowane jego przydatność kliniczna. Podsumowując, wykazaliśmy tutaj, że działanie farmakologiczne (3, 25 (OH) 2D3 polega na złagodzeniu nadmiernej resorpcji kości w warunkach patologicznych, takich jak osteoporoza; robi to poprzez działanie na komórki linii komórek monocytów / makrofagów w szpiku kostnym; że obecność VDR jest warunkiem wstępnym tego działania; i że białko c-Fos jest kluczową cząsteczką docelową działania VDR. W oparciu o te wyniki zsyntetyzowaliśmy nowe analogi witaminy D, wśród których DD281, o silnym działaniu przeciwresorpcyjnym w stosunku do funkcji wchłaniania wapnia, może uzasadniać badanie kliniczne w leczeniu chorób kości związanych z nadmierną aktywnością osteoklastyczną. Metody Odczynniki. 1, 25 (OH) 2D3 i jego analogi, w tym DD208, DD280 i DD281, zsyntetyzowano w firmie Chugai Pharmaceutical Co. Mysz RANKL i M-CSF zakupiono od R & D Systems. Przeciwciała przeciwko RANK, TRAF6, p65 i p52 zakupiono z Santa Cruz Biotechnology Inc. Przeciwciała anty-c-Jun i cc-Fos pochodziły z Sigma-Aldrich. Eksperymenty na zwierzętach. Sześciotygodniowe samice myszy OPO homozygotycznych i heterozygotycznych KO zakupiono od CLEA Japan Inc. i aklimatyzowano przez tydzień w standardowych warunkach laboratoryjnych w 24 ° C. 2 ° C i 50 . 60% wilgotności. Myszom pozwolono na swobodny dostęp do wody wodociągowej i handlowej standardowej karmy dla gryzoni (CE-2) zawierającej 1,20% wapnia, 1,08% fosforanu i 240 IU / 100 g witaminy D3 (CLEA Japan Inc.). Po aklimatyzacji, różne dawki (3, 25 (OH) 2D3 lub nośnika (trigliceryd o średniej długości łańcucha) podawano doustnie 5 razy w tygodniu przez 6 tygodni. Dziewięciotygodniowe samice myszy C57BL / 6J zakupiono od Japonii SLC Inc. i wycięto jajników (OVX) po 1-tygodniowej aklimatyzacji. Pozorowane myszy służyły jako kontrola. Myszy OVX traktowano doustnie (I, 25 (OH) 2D3 (0,0125. 0,05. G / kg masy ciała raz dziennie), jego analogiem DD281 (5. 10. G / kg masy ciała dwa razy dziennie) lub nośnikiem (średni łańcuch trójgliceryd) 5 razy w tygodniu przez 4 tygodnie. Mocz pobrano podczas ostatnich 24 godzin, a próbki krwi odwirowano, aby uzyskać surowicę. Wszystkie eksperymenty przeprowadzono zgodnie z wytycznymi etycznymi Chugai Pharmaceutical Co. w zakresie opieki nad zwierzętami, a protokoły eksperymentalne zostały zatwierdzone przez komitet ds. Opieki nad zwierzętami w firmie oraz przez Komisję ds. Etyki Doświadczeń na Zwierzętach z Narodowego Centrum Geriatrii i Gerontologii. Analiza kości. W celu analizy kości, prawą kość udową i kręgosłup lędźwiowy rozcięto i przechowywano w 70% etanolu. BMD mierzono za pomocą absorpcjometrii rentgenowskiej o podwójnej energii (DCS-600EX, ALOKA Inc.). Lewe kości udowe i kręgi lędźwiowe zostały utrwalone w 4% paraformaldehydzie dla histomorfometrii kości, jak opisano wcześniej (7, 8). Każda próbka została podzielona na części, a następnie wybarwiona na kwasową fosfatazę odporną na działanie kwasu winowego (TRAP). Parametry histomorfometryczne zmierzono w Niigata Bone Science Institute (Niigata, Japonia). Analiza biochemiczna. Stężenie wapnia w surowicy i moczu oznaczono za pomocą autoanalizatora (Hitachi 7170)
[przypisy: masaż nuru na czym polega, trening pod sztuki walki, powiększone węzły chłonne w jamie brzusznej ]
[więcej w: fundacja dzieciom zdążyć z pomocą logowanie, masaż nuru na czym polega, nr na pogotowie ratunkowe ]